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Annexin V-LvFluor TM 488/PI Apoptosis Detection Kit

目录号：D0002

细胞凋亡，或称程序性细胞死亡，是一种用于清除不需要的细胞的正常生理过程。凋亡早期事 件之一是膜磷脂酰丝氨酸（PS）从质膜内侧转移到细胞表面。 Annexin V 是一种 35-36kDa Ca 2+依赖性磷脂结合蛋白，对 PS 具有高度亲和力。用荧光染料 标记的 Annexin V 可通过与暴露的 PS 结合来识别凋亡细胞。PI 是一种膜不透性核酸染料，不能 进入正常细胞和早期凋亡细胞（仍具有膜完整性结构），但能进入细胞膜受损的晚期凋亡和坏死细 胞内与核酸结合，形成红色荧光。Annexin V-LvFluor TM488/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒为细胞凋 亡提供了一种快速简便的检测方法，细胞在含 Ca 2+的结合缓冲液中用 Annexin V-LvFluor TM488 和 PI 染色后，早期凋亡细胞显示仅细胞膜绿色荧光，死细胞显示细胞核红色荧光和细胞膜绿色荧 光，活细胞几乎没有荧光。此外，针对凋亡检测和结果的非标准化问题，本试剂盒还特别提供细胞 凋亡诱导剂。检测可通过流式细胞仪或荧光显微镜进行分析。

价 格 ￥480

Annexin V-LvFluor TM 488/PI Apoptosis Detection Kit

￥480

D0002-20T

¥ 480

D0002-50T

¥ 980

产品规格 请选择

产品描述 使用方法 FAQ 说明书下载

▎产品简介 ：

细胞凋亡，或称程序性细胞死亡，是一种用于清除不需要的细胞的正常生理过程。凋亡早期事 件之一是膜磷脂酰丝氨酸（PS）从质膜内侧转移到细胞表面。 Annexin V 是一种 35-36kDa Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，对 PS 具有高度亲和力。用荧光染料 标记的 Annexin V 可通过与暴露的 PS 结合来识别凋亡细胞。PI 是一种膜不透性核酸染料，不能 进入正常细胞和早期凋亡细胞（仍具有膜完整性结构），但能进入细胞膜受损的晚期凋亡和坏死细 胞内与核酸结合，形成红色荧光。Annexin V-LvFluorTM488/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒为细胞凋 亡提供了一种快速简便的检测方法，细胞在含 Ca2+的结合缓冲液中用 Annexin V-LvFluorTM488 和 PI 染色后，早期凋亡细胞显示仅细胞膜绿色荧光，死细胞显示细胞核红色荧光和细胞膜绿色荧 光，活细胞几乎没有荧光。此外，针对凋亡检测和结果的非标准化问题，本试剂盒还特别提供细胞 凋亡诱导剂。检测可通过流式细胞仪或荧光显微镜进行分析。

▎产品组分 ：

组分D0002-20TD0002-50T

Annexin V Binding Buffer(5×) 

AnnexinV-LvFluorTM488 

Propidium Iodide(PI) 

Apoptosis Positive Control Solution

2 mL 

50 μL 

50 μL 

5 mL 

5 mL 

100 μL 

125 μL 

5 mL 

▎产品验证：

Figure1. Jurkat 细胞不处理（左）或 Apoptosis Inducer 以 1:2000 处理 16 h（右），用 Annexin V-LvFluor™ 488/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒染色。染色样本用流式细胞仪进行检测，PI 用 PE 通道检测; Annexin V-LvFluor™ 488 用 FITC 通道检测。细胞分群主要分为活细胞（Q4）,早期凋亡（Q3）和晚期凋亡（Q2），诱导后，凋亡细胞比例明显增加。

Figure 2. Annexin V-LvFlour™ 488 染色和阻断流式细胞检测实验。Jurkat 细胞分别用 DMSO（NC 组）或 10 µM 喜树碱诱导 5 h（CPT 组）,然后用 Annexin V-LvFlour™ 488 染色（左 1-2），或用 15 µg 重组蛋白 Annexin V 在 1x Annexin V binding buffer 中阻断 15 min 后再用 Annexin V 488 染色(右 1-2)，可以发现重组蛋白 Annexin V 完全阻断了 Annexin V-LvFlour™ 488 信号， 表明 Annexin V-AbFlour™ 488 染色特异性好。



Figure3. L929 细胞用本试剂盒诱导剂诱导经 AnnexinV-LvFluorTM488/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒染色后检测的凋亡效果图。

▎储存条件 ：

4℃避光保存 12 个月，冰袋运输。

▎使用方法：

 试剂准备 

试剂名称试剂准备

1 x Annexin V Binding Buffer 

AnnexinV-LvFluorTM488 

Propidium Iodide(PI) 

Apoptosis Positive Control Solution

用去离子水把5× Annexin V Binding Buffer 稀释成1×。 

即用型 

即用型 

即用型 

 注意：Apoptosis Positive Control Solution 含甲醛，使用过程中请注意安全。此试剂适用于流式。

 流式细胞仪分析 

1. 流式细胞仪器参数调节(可选) 

(1) 收集 1- 3×106个细胞，用预冷的 PBS 离心洗涤 2 次，弃上清。

(2) 加入 500 μL Apoptosis Positive Control Solution 重悬，置冰上孵育 30 min。

(3) 用预冷 PBS 离心洗涤，弃上清。

(4) 加入适量预冷 1×Annexin V Binding Buffer 重悬，并加入数量相同且未经处理的活细胞与之混合，用 1×Annexin V Binding buffer 清洗一次。 

(5) 加入预冷 1×Annexin V Binding Buffer 补充至 1.5 mL，等分成三管，其中一管为空白对照管、两管为单染管。 

(6) 单染管分别加入 2 μL Annexin V-LvFluor™488 或 2.5 μL PI，冰上避光孵育 15 min。

(7) 在流式细胞仪上，用空白管调节 FSC、SSC 和荧光通道的电压，并在此电压条件下，用单染管调节荧光通道的补偿。 

2. 样本检测

注意：选择合适的方法诱导细胞凋亡，同时设置无诱导的对照组。流式检测时推荐用跟实验组相同 的细胞单独制备 Annexin V-LvFluor™488 单染管和 PI 单染管，用于增益和补偿调节，对后期 分群非常有帮助。另外，根据细胞量和细胞类型调整合适的染料浓度对分群效果影响显著。 

(1) 通过所需方法诱导细胞凋亡，同时培养未诱导的对照培养物。

(2) 4℃，300 g 离心 5 min 收集 0.1-1×106细胞，用冰预冷的 PBS 洗涤 2 次。 

注意：贴壁细胞使用胰酶（不含 EDTA）消化后离心收集细胞，如果消化时间过长，易造成细胞膜 结构损伤而出现细胞坏死的假阳性，所以需控制胰酶消化时间（推荐使用温和消化液）。 

(3) 用 500 µL 1×Annexin V Binding Buffer 重悬细胞。 

(4) 每 500 µL 细胞悬液中加入 2 µL Annexin V-LvFluor™ 488 和 2.5 µL PI，轻柔混匀。 

注意：染料使用量可以根据细胞量和细胞类型进行调整。 

(5) 冰上避光孵育约 15 min。 

(6) 孵育结束后置于冰上。染色后 30 min 内通过流式细胞仪分析细胞。使用 491 nm 和 535 nm 激发，在 517 nm（FITC 通道）和 617 nm（PE 或 PI 通道）附近测量荧光。

 荧光显微镜分析 

注意：在荧光显微镜凋亡分析实验中，为确保检测体系的有效性，建议设置阳性对照组。 

1. 对于悬浮细胞：

(1) 按照流式细胞分析步骤制样。 

(2) 将染色好的细胞悬浮置于玻片上，用盖玻片盖住细胞。尽快使用适当的滤镜通过荧光显微镜分 析细胞（AnnexinV-LvFluor TM488 可以使用 FITC 设置拍照，PI 可以使用 Cy®3 或 TexasRed®设 置拍照）。 

2.对于贴壁细胞，按照以下操作步骤（以 24 孔板为例）：

试剂96孔板48孔板24孔板12孔板6孔板

染色工作液体积 (μL)

100

150

200300500

(1) 细胞接种于爬片或腔室载玻片上，培养细胞。 

(2) 通过所需方法诱导细胞凋亡，同时设置无诱导的对照组。

(3) 除去培养基，用 PBS 洗涤细胞 2 次（可用 1×Annexin V Binding Buffer 清洗一次减少漂 浮细胞丢失）。

(4) 准备工作液：每 100 µL 1×Annexin V Binding Buffer 添加 2 µL Annexin V-LvFlour™ 488 和 2.5 µL PI，轻柔混匀。 

注意：染料使用量可以根据细胞量和细胞类型进行调整。 

(5) 在细胞中加入适量的工作液（确保工作液完全覆盖细胞），室温避光孵育约 15 min。（可以适当延长时间增加染色的信号）

(6) 用 1×Annexin V Binding Buffer 洗涤细胞 1-2 次。（可选） 

注意：此步不要使用 PBS 洗涤细胞。 

(7) 使用适当的滤光片在荧光显微镜下分析细胞。

▎注意事项 ：

1. 请按照试剂盒各组分推荐温度储存，避免反复冻融。 

2. 实验过程中务必防止样本干片（尤其是组织切片），干片会导致强烈的非特异性背景染色。 

3. 本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。

▎流程示意图 ：

FAQ 

1．孵育结束后加入，做流式可以不加 1×Annexin V Binding Buffer 吗？ 

可以，加入 1×Annexin V Binding Buffer 的体积是根据流式细胞仪要求的上样体积来确定，如果细胞孵育悬液的体积足够，可以不加入该 Buffer 来补齐体积。 

2．实验结果如何判断？ 

活细胞—没有荧光（Annexin V-/PI-）、早期凋亡细胞—细胞膜绿色荧光（Annexin V+/PI-）、晚期凋亡细胞和坏死细胞呈现双阳性—细胞膜绿色荧光，细胞核红色荧光（Annexin V+/PI+）、 机械损伤或裸核—细胞核红色荧光（Annexin V-/PI+）。 

3．有其它方法做阳性对照吗？ 

将细胞 55℃水浴/金属浴孵育 30min，与正常细胞 1:1 混合可作为单阳管及阳性对照管。但如果要跟实验组对比和调补尝建议采用相同方式诱导。 

4．可以用 PBS 代替 1×Annexin V Binding Buffer 吗？ 

不可以，因为 Annexin V 与磷脂酰丝氨酸（PS）的结合依赖 Ca2+，而常见的 PBS 溶液中不 含 Ca2+，不加 Binding Buffer，会导致 Annexin V 的结合能力降低，造成阳性信号大幅下降甚至无阳性信号。因为这个实验是活细胞染色，先染完第一种染料，如果间隔时间太长，细胞活力会受到影响。 

5．用含 EDTA 的胰酶处理细胞，会不会受影响？ 

细胞消化时尽量避免使用 EDTA，若使用含 EDTA 的胰酶处理可使用 PBS 增加洗涤次数。 

6．该试剂盒可替换 Annexin V-EGFP/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒吗？ 

可以的，使用的检测通道是一致的。

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产品描述

▎产品简介 ：

细胞凋亡，或称程序性细胞死亡，是一种用于清除不需要的细胞的正常生理过程。凋亡早期事 件之一是膜磷脂酰丝氨酸（PS）从质膜内侧转移到细胞表面。 Annexin V 是一种 35-36kDa Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，对 PS 具有高度亲和力。用荧光染料 标记的 Annexin V 可通过与暴露的 PS 结合来识别凋亡细胞。PI 是一种膜不透性核酸染料，不能 进入正常细胞和早期凋亡细胞（仍具有膜完整性结构），但能进入细胞膜受损的晚期凋亡和坏死细 胞内与核酸结合，形成红色荧光。Annexin V-LvFluorTM488/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒为细胞凋 亡提供了一种快速简便的检测方法，细胞在含 Ca2+的结合缓冲液中用 Annexin V-LvFluorTM488 和 PI 染色后，早期凋亡细胞显示仅细胞膜绿色荧光，死细胞显示细胞核红色荧光和细胞膜绿色荧 光，活细胞几乎没有荧光。此外，针对凋亡检测和结果的非标准化问题，本试剂盒还特别提供细胞 凋亡诱导剂。检测可通过流式细胞仪或荧光显微镜进行分析。

▎产品组分 ：

组分D0002-20TD0002-50T

Annexin V Binding Buffer(5×) 

AnnexinV-LvFluorTM488 

Propidium Iodide(PI) 

Apoptosis Positive Control Solution

2 mL 

50 μL 

50 μL 

5 mL 

5 mL 

100 μL 

125 μL 

5 mL 

▎产品验证：

Figure1. Jurkat 细胞不处理（左）或 Apoptosis Inducer 以 1:2000 处理 16 h（右），用 Annexin V-LvFluor™ 488/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒染色。染色样本用流式细胞仪进行检测，PI 用 PE 通道检测; Annexin V-LvFluor™ 488 用 FITC 通道检测。细胞分群主要分为活细胞（Q4）,早期凋亡（Q3）和晚期凋亡（Q2），诱导后，凋亡细胞比例明显增加。

Figure 2. Annexin V-LvFlour™ 488 染色和阻断流式细胞检测实验。Jurkat 细胞分别用 DMSO（NC 组）或 10 µM 喜树碱诱导 5 h（CPT 组）,然后用 Annexin V-LvFlour™ 488 染色（左 1-2），或用 15 µg 重组蛋白 Annexin V 在 1x Annexin V binding buffer 中阻断 15 min 后再用 Annexin V 488 染色(右 1-2)，可以发现重组蛋白 Annexin V 完全阻断了 Annexin V-LvFlour™ 488 信号， 表明 Annexin V-AbFlour™ 488 染色特异性好。



Figure3. L929 细胞用本试剂盒诱导剂诱导经 AnnexinV-LvFluorTM488/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒染色后检测的凋亡效果图。

▎储存条件 ：

4℃避光保存 12 个月，冰袋运输。

使用方法

▎使用方法：

 试剂准备 

试剂名称试剂准备

1 x Annexin V Binding Buffer 

AnnexinV-LvFluorTM488 

Propidium Iodide(PI) 

Apoptosis Positive Control Solution

用去离子水把5× Annexin V Binding Buffer 稀释成1×。 

即用型 

即用型 

即用型 

 注意：Apoptosis Positive Control Solution 含甲醛，使用过程中请注意安全。此试剂适用于流式。

 流式细胞仪分析 

1. 流式细胞仪器参数调节(可选) 

(1) 收集 1- 3×106个细胞，用预冷的 PBS 离心洗涤 2 次，弃上清。

(2) 加入 500 μL Apoptosis Positive Control Solution 重悬，置冰上孵育 30 min。

(3) 用预冷 PBS 离心洗涤，弃上清。

(4) 加入适量预冷 1×Annexin V Binding Buffer 重悬，并加入数量相同且未经处理的活细胞与之混合，用 1×Annexin V Binding buffer 清洗一次。 

(5) 加入预冷 1×Annexin V Binding Buffer 补充至 1.5 mL，等分成三管，其中一管为空白对照管、两管为单染管。 

(6) 单染管分别加入 2 μL Annexin V-LvFluor™488 或 2.5 μL PI，冰上避光孵育 15 min。

(7) 在流式细胞仪上，用空白管调节 FSC、SSC 和荧光通道的电压，并在此电压条件下，用单染管调节荧光通道的补偿。 

2. 样本检测

注意：选择合适的方法诱导细胞凋亡，同时设置无诱导的对照组。流式检测时推荐用跟实验组相同 的细胞单独制备 Annexin V-LvFluor™488 单染管和 PI 单染管，用于增益和补偿调节，对后期 分群非常有帮助。另外，根据细胞量和细胞类型调整合适的染料浓度对分群效果影响显著。 

(1) 通过所需方法诱导细胞凋亡，同时培养未诱导的对照培养物。

(2) 4℃，300 g 离心 5 min 收集 0.1-1×106细胞，用冰预冷的 PBS 洗涤 2 次。 

注意：贴壁细胞使用胰酶（不含 EDTA）消化后离心收集细胞，如果消化时间过长，易造成细胞膜 结构损伤而出现细胞坏死的假阳性，所以需控制胰酶消化时间（推荐使用温和消化液）。 

(3) 用 500 µL 1×Annexin V Binding Buffer 重悬细胞。 

(4) 每 500 µL 细胞悬液中加入 2 µL Annexin V-LvFluor™ 488 和 2.5 µL PI，轻柔混匀。 

注意：染料使用量可以根据细胞量和细胞类型进行调整。 

(5) 冰上避光孵育约 15 min。 

(6) 孵育结束后置于冰上。染色后 30 min 内通过流式细胞仪分析细胞。使用 491 nm 和 535 nm 激发，在 517 nm（FITC 通道）和 617 nm（PE 或 PI 通道）附近测量荧光。

 荧光显微镜分析 

注意：在荧光显微镜凋亡分析实验中，为确保检测体系的有效性，建议设置阳性对照组。 

1. 对于悬浮细胞：

(1) 按照流式细胞分析步骤制样。 

(2) 将染色好的细胞悬浮置于玻片上，用盖玻片盖住细胞。尽快使用适当的滤镜通过荧光显微镜分 析细胞（AnnexinV-LvFluor TM488 可以使用 FITC 设置拍照，PI 可以使用 Cy®3 或 TexasRed®设 置拍照）。 

2.对于贴壁细胞，按照以下操作步骤（以 24 孔板为例）：

试剂96孔板48孔板24孔板12孔板6孔板

染色工作液体积 (μL)

100

150

200300500

(1) 细胞接种于爬片或腔室载玻片上，培养细胞。 

(2) 通过所需方法诱导细胞凋亡，同时设置无诱导的对照组。

(3) 除去培养基，用 PBS 洗涤细胞 2 次（可用 1×Annexin V Binding Buffer 清洗一次减少漂 浮细胞丢失）。

(4) 准备工作液：每 100 µL 1×Annexin V Binding Buffer 添加 2 µL Annexin V-LvFlour™ 488 和 2.5 µL PI，轻柔混匀。 

注意：染料使用量可以根据细胞量和细胞类型进行调整。 

(5) 在细胞中加入适量的工作液（确保工作液完全覆盖细胞），室温避光孵育约 15 min。（可以适当延长时间增加染色的信号）

(6) 用 1×Annexin V Binding Buffer 洗涤细胞 1-2 次。（可选） 

注意：此步不要使用 PBS 洗涤细胞。 

(7) 使用适当的滤光片在荧光显微镜下分析细胞。

▎注意事项 ：

1. 请按照试剂盒各组分推荐温度储存，避免反复冻融。 

2. 实验过程中务必防止样本干片（尤其是组织切片），干片会导致强烈的非特异性背景染色。 

3. 本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。

▎流程示意图 ：

FAQ

FAQ 

1．孵育结束后加入，做流式可以不加 1×Annexin V Binding Buffer 吗？ 

可以，加入 1×Annexin V Binding Buffer 的体积是根据流式细胞仪要求的上样体积来确定，如果细胞孵育悬液的体积足够，可以不加入该 Buffer 来补齐体积。 

2．实验结果如何判断？ 

活细胞—没有荧光（Annexin V-/PI-）、早期凋亡细胞—细胞膜绿色荧光（Annexin V+/PI-）、晚期凋亡细胞和坏死细胞呈现双阳性—细胞膜绿色荧光，细胞核红色荧光（Annexin V+/PI+）、 机械损伤或裸核—细胞核红色荧光（Annexin V-/PI+）。 

3．有其它方法做阳性对照吗？ 

将细胞 55℃水浴/金属浴孵育 30min，与正常细胞 1:1 混合可作为单阳管及阳性对照管。但如果要跟实验组对比和调补尝建议采用相同方式诱导。 

4．可以用 PBS 代替 1×Annexin V Binding Buffer 吗？ 

不可以，因为 Annexin V 与磷脂酰丝氨酸（PS）的结合依赖 Ca2+，而常见的 PBS 溶液中不 含 Ca2+，不加 Binding Buffer，会导致 Annexin V 的结合能力降低，造成阳性信号大幅下降甚至无阳性信号。因为这个实验是活细胞染色，先染完第一种染料，如果间隔时间太长，细胞活力会受到影响。 

5．用含 EDTA 的胰酶处理细胞，会不会受影响？ 

细胞消化时尽量避免使用 EDTA，若使用含 EDTA 的胰酶处理可使用 PBS 增加洗涤次数。 

6．该试剂盒可替换 Annexin V-EGFP/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒吗？ 

可以的，使用的检测通道是一致的。

说明书下载

Annexin V-LvFluor TM 488/PI Apoptosis Detection Kit
目录号：D0002

细胞凋亡，或称程序性细胞死亡，是一种用于清除不需要的细胞的正常生理过程。凋亡早期事 件之一是膜磷脂酰丝氨酸（PS）从质膜内侧转移到细胞表面。 Annexin V 是一种 35-36kDa Ca 2+依赖性磷脂结合蛋白，对 PS 具有高度亲和力。用荧光染料 标记的 Annexin V 可通过与暴露的 PS 结合来识别凋亡细胞。PI 是一种膜不透性核酸染料，不能 进入正常细胞和早期凋亡细胞（仍具有膜完整性结构），但能进入细胞膜受损的晚期凋亡和坏死细 胞内与核酸结合，形成红色荧光。Annexin V-LvFluor TM488/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒为细胞凋 亡提供了一种快速简便的检测方法，细胞在含 Ca 2+的结合缓冲液中用 Annexin V-LvFluor TM488 和 PI 染色后，早期凋亡细胞显示仅细胞膜绿色荧光，死细胞显示细胞核红色荧光和细胞膜绿色荧 光，活细胞几乎没有荧光。此外，针对凋亡检测和结果的非标准化问题，本试剂盒还特别提供细胞 凋亡诱导剂。检测可通过流式细胞仪或荧光显微镜进行分析。
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