▎使用方法（转染指南下载）
siRNA 转染（以 24 孔板为例，其他孔板参照下表）
细胞接种
转染前一天接种细胞，每孔加入 500 μL 含血清的完全培养基，使转染时细胞密度达到 30% –50%。转染过程中尽量避免使用抗生素。
制备 siRNA-转染试剂复合物
1. 取 12 pmol siRNA，用 25 μL Trans Enhancer 稀释。
2. 取 1.5 μL siRNA Transfection Reagent，用 25 μL Trans Enhancer 稀释，轻轻混匀，室温 孵育 5 min。
注意：确保在 15 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。
3. 孵育 5min 后，将 siRNA 稀释液与 siRNA Transfection Reagent 稀释液混合（总体积 50 μL）。轻轻混匀，室温孵育 15 min。
将转染复合物加到培养的细胞（可完全培养基培养）
1. 将 50 μL 转染复合物加入培养孔中（孔内已有 0.5 mL 含细胞的完全培养基），轻轻晃动培 养板使其混匀。
2. 37°C 培养 18-72h。如需通过 RT-qPCR 检测基因抑制效果，可在培养结束后进行。若使用 Fam 标记的 siRNA，可在转染后约 12 小时通过荧光显微镜观察转染阳性情况。
转染实验优化: 为了提高转染效率，建议对转染条件进行优化，特别是首次使用。例如：24 孔培养板， siRNA 用 量在 6、12、18pmol (final concentration 10- 30 nM)之间调整，siRNA Transfection Reagent 试剂用量在 1.0 - 2.0μl 之间调整。
注意事项：
转染过程尽量不要使用抗生素，否则会导致细胞死亡增加；
计算接种细胞的数量，使转染时细胞密度在 30-50%左右，一般细胞 24 孔板每孔接种数在 4x10 4 左右；
使用荧光标记的 siRNA 如 Fam-NC 进行荧光观察时，24 孔板每孔建议用量调整为 24pmol，12 孔板和 6 孔板用量建议加倍，观察荧光前，建议将含有荧光的原培养液吸弃， 用 PBS 洗涤 2 次，再荧光显微镜观察；
为减少操作步骤和孔间差异，如有 2 个以上培养孔加入同一种 siRNA，可在同一个灭菌洁净 PP 管内制备转染复合物，其中 siRNA、siRNA Transfection Reagent、Trans Enhancer 的 加入量为单孔使用量 x 孔数，转染复合物制备完成后，再等量加入到每个培养孔中，每孔加 入转染复合物的量为：96 孔板 12µl、48 孔板 26µl、24 孔板 50µl、12 孔板 100µl、6 孔 板 250µl。
▎注意事项 ：
1. 使用高纯度的、无内毒素的 siRNA 有助于获得较高的转染效率。
2. 转染前细胞必须处于良好的生长状态。
3. 转染试剂不宜涡旋振荡或离心，应缓慢晃动混匀。
4. 转染后无需去掉混合物或更换培养基，如果需要更换培养基，可以在血清消耗，培养基变色的 情况下更换。
5. 转染试剂使用后请立即盖好盖子，避免长时间暴露在空气中，影响转染效率。
6. 转染 siRNA 时，所有耗材均需要是 RNase-free。
7. 本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。
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