▎FAQ
1. 该电泳液与传统的Tris-甘氨酸-SDS电泳液有何不同？
答： 传统Laemmli电泳液离子强度较低，跑胶时间约45-60分钟。本配方提高了Tris和甘氨酸浓度，并添加了HEPES作为辅助缓冲剂，具有以下优势：
速度更快：200 V下30-35分钟完成，适合快速筛选。
缓冲能力更强：HEPES在pH 7.2-8.4区间缓冲能力强，减少阳极酸化，条带更锐利。
分辨率高：对小分子量蛋白（<25 kDa）和相近分子量蛋白分离效果更好。
2. 电泳时是否需要冰浴？最高耐受电压是多少？
答： 本配方离子强度较高，电导率大于传统缓冲液，因此产热也较高。在室温（25℃以下）200 V电泳35分钟，一般无需冰浴。若环境温度较高或电压提升至220-250 V，建议将电泳槽置于冰浴中或使用循环水制冷，以防凝胶过热变形或出现“微笑条带”。最高耐受电压可达250 V，但需密切监控电流（通常不超过400 mA）和凝胶温度。
3. 能否用于Bis-Tris凝胶体系？
答： 可以。本电泳液与Bis-Tris预制胶或自制胶兼容。Bis-Tris凝胶通常在酸性pH下配制（分离胶pH 6.4-7.0），搭配本电泳液（pH 8.3）使用，仍能获得良好的条带压缩和分离效果。但建议转膜前用转膜液平衡凝胶1-2分钟，以去除残留的高浓度甘氨酸。
4. 浓缩胶（积层胶）的pH是否需要调整？
答： 如果使用的是传统Tris-HCl浓缩胶（pH 6.8），与本电泳液（pH 8.3）配合通常效果良好。但为了达到最佳条带压缩效果，可将浓缩胶的缓冲体系调整为Tris-HCl pH 7.2-7.5，或使用HEPES-NaOH体系的浓缩胶（pH 7.2）。如果发现样品孔中的条带在电泳起始阶段扩散或拖尾，建议适当调整浓缩胶pH。
5. 为何有时条带会出现“微笑”（两边上翘）或拖尾现象？
答： 可能原因及解决方法：
产热过高：降低电压（如180 V）或置于冰浴中。
凝胶聚合不均匀：确保APS和TEMED新鲜，凝胶充分凝固。
电泳液反复使用：本产品不建议重复使用超过3次，因为离子强度和pH会漂移。
上样量过大或盐浓度过高：减少上样量或对上样样品进行脱盐。
凝胶浓度与蛋白分子量不匹配：大分子量蛋白（>150 kDa）使用低浓度凝胶（6-8%），小分子量蛋白使用高浓度凝胶（12-15%）。
6. 能否与快速转膜液(WD410)配套使用？
答： 完全兼容。电泳结束后，将凝胶在快速转膜液中简单漂洗10-15秒，去除表面甘氨酸，即可直接进行快速湿转。转膜条件推荐400 mA恒流，时间根据蛋白大小选择（小分子5-15分钟，中等15-25分钟，大分子25-35分钟）。若电泳液中甘氨酸残留较多，可适当延长漂洗时间或降低转膜电流。
7. 本电泳液能用于分离小分子量蛋白（<10 kDa）吗？
答： 可以，但建议配合高浓度分离胶（16-20%）或Tricine-SDS-PAGE体系。本电泳液的高离子强度有助于抑制小分子蛋白的扩散，配合HEPES的缓冲能力，小分子条带通常比传统Laemmli体系更锐利。若仍感分离不理想，可尝试在电泳液中加入5%甘油或降低电压至150 V。
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