▎使用方法
v 染色
常规大小凝胶在蛋白电泳后,用去离子水稍微润洗一下(润洗步骤可省略),小心倒掉液体,加入约20-30ml超快染色液,染色5-60分钟。去除染色液后(可回收后重复使用2-3次),用去离子水稍微润洗一下(润洗步骤可省略),即可进行拍照。通常染色5-10分钟即可观察到良好的蛋白染色条带,并可以进行拍照。
注1:加入适量的考马斯亮蓝超快染色液(免脱色) (每块大小约7×8cm的凝胶需使用约20-30ml),使染色液能盖住凝胶,且液面至少高出三个胶的厚度为宜,室温(20-25ºC)在翘板摇床或水平摇床上进行染色。
注2:在室温的染色时间宜为5-60分钟,实际染色时间可以根据所需的染色效果自行调整。染色至能看到清晰的目标蛋白条带后,弃染色液,加入适量的去离子水,洗去残留的染色液,停止染色反应,然后即可拍照记录。如果希望获得没有背景的凝胶图片,可以进行后续用水漂洗的脱色步骤。通常染色5分钟就可以肉眼观察到约10ng的蛋白条带,染色10分钟就可以肉眼观察到约5ng 的蛋白条带。凝胶的合适染色时间和凝胶厚度以及蛋白上样量有关,较薄的凝胶染色时间可以略短,较厚的凝胶染色时间可以略长,具体以是否达到预期的染色效果为准。简单查看蛋白染色效果时染色2-5分钟就可以了。通常推荐染色5-60分钟即可,但如果没有停止染色并染色更长时间也是可以的,后续适当用水进行背景脱色即可。
注3:本染色液可以酌情重复使用2-3次,但染色效果会比第一次略差,且染色速度会逐渐变慢。具体可以重复使用的次数和每次考马斯亮蓝超快染色液(免脱色)使用时凝胶中的总蛋白量以及凝胶厚度有关,总蛋白量越少凝胶越薄,可以重复使用的次数越多。
v 染色
如需进一步降低染色背景,可加入适量去离子水,在摇床上摇动脱色5-30分钟。通常不脱色即可获得很低的染色背景,而用去离子水脱色30分钟即可获得极低的背景。
注:上述的洗涤、染色和脱色时间均适用于0.75-1.5mm厚的凝胶,对于更厚的凝胶,染色和脱色的时间均须适当延长。
▎注意事项
1. 使用后,请及时密封以避免乙醇挥发导致失效。
2. 请根据凝胶面积和厚度,选择合适的染液体积和染色时间。
3. 本产品可以重复利用至少3次,随使用次数的增加,染色速度会略微下降,可以延长染色时间,灵敏度不受影响。
4. 本产品通过吸附去垢剂提升染色效率,随着使用次数增加,可能会产生银色絮状或微量沉淀,属于正常现象,可以摇晃混匀或37°C水浴溶解后使用。
5. 使用本试剂盒时注意有效防护,为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。