►Marker的条带亮度弱或没有条带
①DNA Marker上样量较低,可适当增加上样量。
②电泳时间过长,导致Marker条带跑出凝胶,可缩短电泳时间,降低电压,增加凝胶浓度。
③制胶时忘加核酸染料或染胶时间过短。
►Marker跑胶拖带或跑不开
①按照推荐的电泳条件,1 × TAE/TBE缓冲液,0.8% - 2.0%琼脂糖凝胶,正负极之间电压4 - 10 V/cm(常规电泳仪建议180-200V电压)跑胶。
②如果大分子染料建议使用泡染法或者预混法。
③确保溶胶时琼脂糖颗粒全部溶解;确保胶充分冷却凝结,30-60min为宜,如果不能及时使用,要放在TAB/TBE液体中保存。
►Marker条带不规则,如哑铃型或波浪形
①电泳条件不合适:电泳时电压最高不应超过20V/cm,电压太高可能也会导致Marker条带出现不规则现象。
②电泳缓冲液陈旧:老化的电泳缓冲液离子浓度降低,ph值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果,建议经常更换电泳缓冲液。
③凝胶质量差以及凝胶冷却时凝固不均匀。
►Marker条带缺失
①条带重叠:延长跑胶时间,适当提高电压。
②条带跑出胶或丢失:降低电压缩短跑胶时间。使用EB作为核酸染料时,由于EB与DNA的结合力较弱,且EB与DNA的电泳方向相反。电泳时间较长时,DNA条带跑到前面,EB就可能与DNA脱离,从而使条带变弱。因此电泳时将溴酚蓝跑到凝胶2/3处即可停止电泳。
③EB或核酸染料添加量低。
►Marker条带模糊
①Marker条带出现降解:请确保在使用过程中避免核酸酶污染。
②电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲也多次使用后,离子浓度降低,ph值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果,建议经常更换电泳缓冲液。
③电泳条件不合适:电泳时电压应不超过20V/cm,温度应低于30℃。
►能不能用作聚丙烯酰胺凝胶电泳Marker
①此Marker不适用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。