目录号：P10

2x LeanV Rapid Taq Master Mix (Dye Plus)包含抗体修饰的Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg2+及经过优化的缓冲体系；与Taq DNA Polymerase相比, Taq II DNA Polymerase的扩增速度更快，扩增效率更高，保真性更优秀。扩增得到的部分PCR产物 3′端附有一个“A”碱基，因此纯化后的产物可直接用于T/A克隆，也可用于Gibson组装。主要适用于常规PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。

价格￥235

￥235

P10-5mL

¥ 235

P10-15mL

¥ 620

P10-50mL

¥ 1800

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产品描述使用方法 FAQ 说明书下载引用文献

▎产品简介：

2x LeanV Rapid Taq Master Mix (Dye Plus)包含抗体修饰的Rapid Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg2+及经过优化的缓冲体系；与Taq DNA Polymerase相比, Taq DNA Polymerase的扩增速度更快，扩增效率更高，保真性更优秀。扩增得到的部分PCR产物 3′端附有一个“A”碱基，因此纯化后的产物可直接用于T/A克隆，也可用于Gibson组装。主要适用于常规PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。

▎产品组分：

组分

P10-5

P10-15

P10-50

2× LeanV Rapid Taq Master Mix (Dye Plus)

5×1 mL

15×1 mL

50×1 mL

▎适用范围：

本产品适用于以基因组 DNA、cDNA、质粒、含尿嘧啶的 DNA 以及粗品为模板的 PCR 反应。

模板类型	推荐模板用量
动植物基因组 DNA	0.1~1 μg
大肠杆菌基因组 DNA	10~100 ng
质粒 DNA	0.1~10 ng
λDNA	0.5~10 ng
cDNA	1~5 μL(加入体积不宜超过反应总体积的 1/10)

▎产品优势：

高成功率：轻松准确扩出目的条带
结果分析方便：本产品中含有电泳指示剂，PCR反应结束后可直接进行电泳分析

操作便捷：加入引物和模板即可进行扩增，减少实验操作的步骤

▎储存条件：

- 30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。

▎实验流程：

1. 配制检测试剂

试剂

体积

2× LeanV Rapid Taq Master Mix (Dye Plus)

Forward Primer (10μM)

Reverse Primer (10μM)

模板DNA

DNase-free Water

25 μL

2 μL*

X μL

up to 50 μL

* 通常引物终浓度为0.4 μM即可得到理想效果，若效果不佳时也可在 0.1~1 μM 间进行调整。

# 对于产物序列在 1.5kb 以内的 PCR 反应（简单序列），延伸时间可设置为 1 sec；若需得到更高的 pcr 产量，序列长度在 0-3 kb 的 PCR 反应，可延长延伸时间至 15~30 sec/kb，3K 以上的序列可调整延伸时间至 30~60sec/kb。

2. 反应程序设置

95℃

3-5 min

预变性

95℃

55℃*

72℃

15 Sec

20 Sec

15 Sec/kb#

30-35 cycles

72℃

5 min

终延伸

该预变性条件适合绝大多数扩增反应，可根据模板结构复杂程度修改。如模板结构复杂，可将预变性时间延长至 5 - 10 min 以提高预变性效果。

* 退火温度需要根据引物的 Tm 值进行调整，一般设置成低于引物 Tm 3~5℃。

▎注意事项：

1. 请于使用前确保产品完全解冻，彻底混匀后短暂离心，置于冰上备用。

2. 反复冻融会影响产品的性能。

3. 为了提高扩增成功率和产量，请使用高质量的模板。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Q1：扩增效率低，实验组无扩增条带。

A1：(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解；引物设计是否合理，可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

(2) 模板

长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的DNA双链作为模板；模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开，此时加入PCR Enhancer，可以有效降低解链温度；模板的GC含量过低会导致扩增效率较差，可适当延长引物长度或通过梯度PCR摸索合适的反应条件；模板中存在抑制物，特别是甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，会造成DNA脱嘌呤而影响PCR结果，建议稀释使用或重新制备；若模板为cDNA，要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。

(3) 酶

反应所用的酶因保存或运输不当而失活，建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。

(4) 扩增体系

反应体系配制错误，建议重复实验。

(5) 反应程序

检查变性温度是否准确，PCR仪指示温度与实际温度是否相符。如果温度过高，酶在前几个循环就迅速失活；温度过低则模板变性不彻底。可对退火温度设置梯度，摸索合适的退火温度。检测延伸时间是否充足。

(6) Mg2+浓度不合适

Mg2+浓度过低可影响PCR产量甚至使PCR扩增失败；Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性，应适当调整Mg2+浓度。

Q2：空白对照出现扩增产物。

A2：(1) 引物设计不合理

扩增序列与非目的扩增序列有同源性，PCR也可以扩增出非靶序列的序列。

(2) 若扩增产物条带大小与目的条带一致，说明有污染

更换新的Mix、水或引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制，减少气溶胶污染。

(3) 为了避免靶序列受到整个基因组或大片段的交叉污染，操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

(4) 为了避免靶基因受到空气中小片段核酸污染，可用巢式PCR方法减轻或消除污染。

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产品描述

▎产品简介：

▎产品组分：

组分

P10-5

P10-15

P10-50

2× LeanV Rapid Taq Master Mix (Dye Plus)

5×1 mL

15×1 mL

50×1 mL

▎适用范围：

本产品适用于以基因组 DNA、cDNA、质粒、含尿嘧啶的 DNA 以及粗品为模板的 PCR 反应。

模板类型	推荐模板用量
动植物基因组 DNA	0.1~1 μg
大肠杆菌基因组 DNA	10~100 ng
质粒 DNA	0.1~10 ng
λDNA	0.5~10 ng
cDNA	1~5 μL(加入体积不宜超过反应总体积的 1/10)

▎产品优势：

高成功率：轻松准确扩出目的条带
结果分析方便：本产品中含有电泳指示剂，PCR反应结束后可直接进行电泳分析

操作便捷：加入引物和模板即可进行扩增，减少实验操作的步骤

▎储存条件：

- 30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。

使用方法

▎实验流程：

1. 配制检测试剂

试剂

体积

2× LeanV Rapid Taq Master Mix (Dye Plus)

Forward Primer (10μM)

Reverse Primer (10μM)

模板DNA

DNase-free Water

25 μL

2 μL*

X μL

up to 50 μL

* 通常引物终浓度为0.4 μM即可得到理想效果，若效果不佳时也可在 0.1~1 μM 间进行调整。

2. 反应程序设置

95℃

3-5 min

预变性

95℃

55℃*

72℃

15 Sec

20 Sec

15 Sec/kb#

30-35 cycles

72℃

5 min

终延伸

该预变性条件适合绝大多数扩增反应，可根据模板结构复杂程度修改。如模板结构复杂，可将预变性时间延长至 5 - 10 min 以提高预变性效果。

* 退火温度需要根据引物的 Tm 值进行调整，一般设置成低于引物 Tm 3~5℃。

▎注意事项：

1. 请于使用前确保产品完全解冻，彻底混匀后短暂离心，置于冰上备用。

2. 反复冻融会影响产品的性能。

3. 为了提高扩增成功率和产量，请使用高质量的模板。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

FAQ

Q1：扩增效率低，实验组无扩增条带。

A1：(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解；引物设计是否合理，可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

(2) 模板

(3) 酶

反应所用的酶因保存或运输不当而失活，建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。

(4) 扩增体系

反应体系配制错误，建议重复实验。

(5) 反应程序

(6) Mg2+浓度不合适

Mg2+浓度过低可影响PCR产量甚至使PCR扩增失败；Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性，应适当调整Mg2+浓度。

Q2：空白对照出现扩增产物。

A2：(1) 引物设计不合理

扩增序列与非目的扩增序列有同源性，PCR也可以扩增出非靶序列的序列。

(2) 若扩增产物条带大小与目的条带一致，说明有污染

更换新的Mix、水或引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制，减少气溶胶污染。

(3) 为了避免靶序列受到整个基因组或大片段的交叉污染，操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

(4) 为了避免靶基因受到空气中小片段核酸污染，可用巢式PCR方法减轻或消除污染。

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