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2× LeanV Taq II Master Mix (Dye Plus)

【PCR系列】 【有染料】

目录号:P11

2x LeanV Taq II Master Mix (Dye Plus)包含化学修饰的Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg2+及经过优化的缓冲体系;与Taq DNA Polymerase相比, Taq II DNA Polymerase的扩增速度更快,扩增效率更高,保真性更优秀。扩增得到的部分PCR产物 3′端附有一个“A”碱基,因此纯化后的产物可直接用于T/A克隆,也可用于Gibson组装。主要适用于常规PCR反应和对高 保真性有要求的基因克隆等实验。

价 格 ¥245

2× LeanV Taq II Master Mix (Dye Plus)

¥245

P11-5mL

¥ 245

P11-15mL

¥ 638

P11-50mL

¥ 1880

产品规格 请选择
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产品描述 使用方法 FAQ 说明书下载 引用文献

▎产品简介 :


2x LeanV Taq II Master Mix (Dye Plus)包含化学修饰的Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg2+及经过优化的缓冲体系;与Taq DNA Polymerase相比, Taq II DNA Polymerase的扩增速度更快,扩增效率更高,保真性更优秀。扩增得到的部分PCR产物 3′端附有一个“A”碱基,因此纯化后的产物可直接用于T/A克隆,也可用于Gibson组装。主要适用于常规PCR反应和对高 保真性有要求的基因克隆等实验。


▎产品组分 :


组分P11-5P11-15P11-50

2× LeanV Taq II Master Mix (Dye Plus)

5×1 mL

15×1 mL50×1 mL

▎适用范围 :

本产品适用于快速PCR法扩增DNA。


▎产品优势 :


高成功率:轻松准确扩出目的条带
结果分析方便:本产品中含有电泳指示剂,PCR反应结束后可直接进行电泳分析

操作便捷:加入引物和模板即可进行扩增,减少实验操作的步骤

▎储存条件 :

 - 30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。



▎实验流程 :

1. 配制检测试剂

试剂体积

2× LeanV Taq II Master Mix (Dye Plus)

Forward Primer (10μM)

Reverse Primer (10μM)

模板DNA

DNase-free Water

25 μL

2 μL*

2 μL*

X μL#

up to 50 μL

* 通常引物终浓度为0.4 μM即可得到理想效果,若效果不佳时也可在 0.1~1 μM 间进行调整。 

# 基因组DNA推荐用量为10~400ng,模板为未稀释的cDNA 用量体积不超过PCR总体积1/10,质粒0.1~10ng。

反应体系配好后,盖好反应盖,充分涡旋混匀,离心,避免产生气泡。

2. 反应程序设置

95℃3-5 min预变性

95℃

58℃*

72℃

15 Sec

20 Sec

15-30 Sec/kb


30-35 cycles

72℃5 min终延伸

* 退火温度需要根据引物的 Tm 值进行调整,一般设置成低于引物 Tm 3~5℃。


▎注意事项 :

1. 请于使用前确保产品完全解冻,彻底混匀后短暂离心,置于冰上备用。 

2. 反复冻融会影响产品的性能。 

3. 为了提高扩增成功率和产量,请使用高质量的模板。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


Q1:扩增效率低,实验组无扩增条带。

A1:(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解;引物设计是否合理,可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

(2) 模板

长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开,此时加入PCR Enhancer,可以有效降低解链温度;模板的GC含量过低会导致扩增效率较差,可适当延长引物长度或通过梯度PCR摸索合适的反应条件;模板中存在抑制物,特别是甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,会造成DNA脱嘌呤而影响PCR结果,建议稀释使用或重新制备;若模板为cDNA,要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。

(3) 酶

反应所用的酶因保存或运输不当而失活,建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。

(4) 扩增体系

反应体系配制错误,建议重复实验。

(5) 反应程序

检查变性温度是否准确,PCR仪指示温度与实际温度是否相符。如果温度过高,酶在前几个循环就迅速失活;温度过低则模板变性不彻底。可对退火温度设置梯度,摸索合适的退火温度。检测延伸时间是否充足。

(6) Mg2+浓度不合适

Mg2+浓度过低可影响PCR产量甚至使PCR扩增失败;Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性,应适当调整Mg2+浓度。

 

Q2:空白对照出现扩增产物。

A2:(1) 引物设计不合理

扩增序列与非目的扩增序列有同源性,PCR也可以扩增出非靶序列的序列。

(2) 若扩增产物条带大小与目的条带一致,说明有污染

更换新的Mix、水或引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。

(3) 为了避免靶序列受到整个基因组或大片段的交叉污染,操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

(4) 为了避免靶基因受到空气中小片段核酸污染,可用巢式PCR方法减轻或消除污染。


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产品描述

▎产品简介 :


2x LeanV Taq II Master Mix (Dye Plus)包含化学修饰的Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg2+及经过优化的缓冲体系;与Taq DNA Polymerase相比, Taq II DNA Polymerase的扩增速度更快,扩增效率更高,保真性更优秀。扩增得到的部分PCR产物 3′端附有一个“A”碱基,因此纯化后的产物可直接用于T/A克隆,也可用于Gibson组装。主要适用于常规PCR反应和对高 保真性有要求的基因克隆等实验。


▎产品组分 :


组分P11-5P11-15P11-50

2× LeanV Taq II Master Mix (Dye Plus)

5×1 mL

15×1 mL50×1 mL

▎适用范围 :

本产品适用于快速PCR法扩增DNA。


▎产品优势 :


高成功率:轻松准确扩出目的条带
结果分析方便:本产品中含有电泳指示剂,PCR反应结束后可直接进行电泳分析

操作便捷:加入引物和模板即可进行扩增,减少实验操作的步骤

▎储存条件 :

 - 30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。



使用方法

▎实验流程 :

1. 配制检测试剂

试剂体积

2× LeanV Taq II Master Mix (Dye Plus)

Forward Primer (10μM)

Reverse Primer (10μM)

模板DNA

DNase-free Water

25 μL

2 μL*

2 μL*

X μL#

up to 50 μL

* 通常引物终浓度为0.4 μM即可得到理想效果,若效果不佳时也可在 0.1~1 μM 间进行调整。 

# 基因组DNA推荐用量为10~400ng,模板为未稀释的cDNA 用量体积不超过PCR总体积1/10,质粒0.1~10ng。

反应体系配好后,盖好反应盖,充分涡旋混匀,离心,避免产生气泡。

2. 反应程序设置

95℃3-5 min预变性

95℃

58℃*

72℃

15 Sec

20 Sec

15-30 Sec/kb


30-35 cycles

72℃5 min终延伸

* 退火温度需要根据引物的 Tm 值进行调整,一般设置成低于引物 Tm 3~5℃。


▎注意事项 :

1. 请于使用前确保产品完全解冻,彻底混匀后短暂离心,置于冰上备用。 

2. 反复冻融会影响产品的性能。 

3. 为了提高扩增成功率和产量,请使用高质量的模板。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


FAQ

Q1:扩增效率低,实验组无扩增条带。

A1:(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解;引物设计是否合理,可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

(2) 模板

长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开,此时加入PCR Enhancer,可以有效降低解链温度;模板的GC含量过低会导致扩增效率较差,可适当延长引物长度或通过梯度PCR摸索合适的反应条件;模板中存在抑制物,特别是甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,会造成DNA脱嘌呤而影响PCR结果,建议稀释使用或重新制备;若模板为cDNA,要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。

(3) 酶

反应所用的酶因保存或运输不当而失活,建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。

(4) 扩增体系

反应体系配制错误,建议重复实验。

(5) 反应程序

检查变性温度是否准确,PCR仪指示温度与实际温度是否相符。如果温度过高,酶在前几个循环就迅速失活;温度过低则模板变性不彻底。可对退火温度设置梯度,摸索合适的退火温度。检测延伸时间是否充足。

(6) Mg2+浓度不合适

Mg2+浓度过低可影响PCR产量甚至使PCR扩增失败;Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性,应适当调整Mg2+浓度。

 

Q2:空白对照出现扩增产物。

A2:(1) 引物设计不合理

扩增序列与非目的扩增序列有同源性,PCR也可以扩增出非靶序列的序列。

(2) 若扩增产物条带大小与目的条带一致,说明有污染

更换新的Mix、水或引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。

(3) 为了避免靶序列受到整个基因组或大片段的交叉污染,操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

(4) 为了避免靶基因受到空气中小片段核酸污染,可用巢式PCR方法减轻或消除污染。


说明书下载

引用文献
2× LeanV Taq II Master Mix (Dye Plus)
目录号:P11

2x LeanV Taq II Master Mix (Dye Plus)包含化学修饰的Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg2+及经过优化的缓冲体系;与Taq DNA Polymerase相比, Taq II DNA Polymerase的扩增速度更快,扩增效率更高,保真性更优秀。扩增得到的部分PCR产物 3′端附有一个“A”碱基,因此纯化后的产物可直接用于T/A克隆,也可用于Gibson组装。主要适用于常规PCR反应和对高 保真性有要求的基因克隆等实验。

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