▎实验流程 :
1.配制 cDNA 合成反应体系
| 试剂 | 体积 |
All-in-One Plus RT SuperMix 4× RT SuperMix RNase-free Water | 5 μL ≦ 1μg up to 20 μL |
使用移液器轻轻吹打混匀, 并进行瞬时离心。
2. 按下列条件进行cDNA 合成
* 特殊处理样本可延长逆转录时间至10 min,延长反应时间可提高cDNA得率。
产物可立即用于qPCR反应,或在-20°C保存,并在半年内使用;长期存放建议分装后于-70°C保存,应避免反复冻融。
▎注意事项 :
1. 请于使用前确保产品完全解冻,彻底混匀后短暂离心,置于冰上备用。
2. 应避免样品间交叉污染和气溶胶污染,同时使用RNase-free的离心管、枪头等耗材。
3. cDNA产物可直接用作qPCR反应的模板。建议作为模板的cDNA产物的体积不超过qPCR反应体积的1/10。
4. 延长逆转录时间至15 min最长可获得5 kb大小的cDNA, 不适用于克隆等下游实验的长片段PCR扩增,如有需要可选择
#N-104产品。
5. 为保证您的安全和实验顺利,请保持实验区域洁净,操作时需穿戴干净的实验服、口罩、一次性手套。