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HSF Blue Universal SYBR qPCR Master Mix

【qPCR系列】 【指示色:蓝色】

目录号:S121

HSF Blue Universal SYBR qPCR Master Mix是使用SYBR Green I 嵌合荧光法进行qPCR的专用预混液,颜色为蓝色,方便加样指示。Hot Start Fast Taq DNA Polymerase为一种新型的化学法修饰的热启动DNA聚合酶,具有特异性强、灵敏度高等特点, 可在宽广的定量区域内获得良好的标准曲线,实验结果重复性好、可信度高。另外,预混液体系中添加了特殊ROX Reference Dye,适用于不同qPCR 仪器,配置反应体系时只需加入引物和模板即可扩增。

价 格 ¥600

HSF Blue Universal SYBR qPCR Master Mix

¥600

S121-5mL

¥ 600

产品规格 请选择
附件

产品描述 使用说明 FAQ 说明书下载

▎产品简介 :


HSF Blue Universal SYBR qPCR Master Mix是使用SYBR Green I 嵌合荧光法进行qPCR的专用预混液,颜色为蓝色,方便加样指示。 预混液主要成分包括化学修饰的Hot Start Fast Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg2+、SYBR Green I和针对qPCR优化的预混Buffer。 其中Hot Start Fast Taq DNA Polymerase为一种新型的化学法修饰的热启动DNA聚合酶,具有特异性强、灵敏度高等特点, 可在宽广的定 量区域内获得良好的标准曲线,实验结果重复性好、可信度高。另外,预混液体系中添加了特殊ROX Reference Dye,适用于不同 qPCR 仪器,配置反应体系时只需加入引物和模板即可扩增。


▎产品组分 :


组分S121

2× HSF Blue Universal SYBR qPCR Master Mix

DNase-free Water

5×1 mL

5×1 mL

▎适用范围 :

本试剂用于DNA样本的扩增定量,可以扩增所有物种来源的DNA,样本类型可以是基因组DNA、cDNA、质粒DNA等。

▎实验案例 :

更稳定及更高的拷贝效率

以相同的小鼠肝组织逆转率的cDNA为模板,使用LianWei #S121、和市售其他Sybr试剂(进口标杆SupplierA、国产试剂SupplierB、C),按照各自说明书推荐程序进行q-PCR反应,通过对Ct 值统计分析,从结果 (图A) 中可以看出LianWei #S121 与 Supplier A 在相同的测试体系 (20μL) 下获得了较低的Ct值,且明显超过了Supplier B、C 等产品。(* p≦0.05)。


较高的扩增平台值

在相同模板和qPCR体系下,按照各自说明书推荐程序进行q-PCR反应, 对Amplification Curves进行分析 (图2), 结果显示,LianWei #S121与同类产品相比 (SupplierA、B、C),LianWei #S121 Sybr预混液灵敏度高,稳定扩增的同时荧光强度更强,轻松获得较高的平台值。


较平滑的溶解曲线

在相同模板和qPCR体系下,按照各自说明书推荐程序进行q-PCR反应, 通过对 Melting Peaks进行观察 (图3)发现LianWei #S121与同类产品 SupplierA 相比有着更为平滑的溶解曲线,且只有一单峰。 




▎产品优势 :


更灵敏、更稳定的拷贝效率:S121 与同类其他产品相比有着更小的Ct值,且组内差异更小


较高的扩增平台:与市售其他Sybr预混液相比, S121 可得到更高的扩增平台


更平滑的溶解曲线:S121 与同类其他产品相比溶解曲线更为平滑,且减少二聚体的产生,稳定性好,重复性好

▎储存条件 :

避光保存, - 30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。





▎实验流程 :

1. 按下表配制qPCR反应体系

试剂体积

2× HSF Blue Universal SYBR qPCR Master Mix

Forward Primer (10μM)

Reverse Primer (10μM)

模板DNA/cDNA

DNase-free Water

10 μL

0.4 μL*

0.4 μL*

X μL#

up to 20 μL

* 通常引物终浓度为0.2 μM即可得到较好的扩增效果,若结果循环数不理想也可根据实际情况在0.1~1μM 间进行调整。

# 微量体积加样时误差大,建议模板稀释后再加入反应体系,可以有效提高实验的重复性;若未稀释cDNA原液,使用体积不应超过qPCR反应总体积 的 1/10。 

反应体系配好后,盖好反应盖,充分涡旋混匀,离心,避免产生气泡。

2. 按下列条件进行qPCR反应

快速程序: 

Stage
步骤温度
时间循环数
Stage1预变性95 ℃5 min
1
Stage2循环反应

95 ℃

60 ℃

2 Sec

20 Sec

40
Stage3溶解曲线仪器默认设置1



标准程序: 

Stage
步骤温度
时间循环数
Stage1预变性95 ℃5 min
1
Stage2循环反应

95 ℃

60 ℃

15 Sec

40 Sec

40
Stage3溶解曲线仪器默认设置1

*快速程序适合绝大多数扩增反应, 若模板复杂、结果不佳或目标扩增子超过200 bp推荐使用标准程序。


▎注意事项 :

1. 请于使用前确保产品完全解冻,彻底混匀后短暂离心,置于冰上备用。 

2. 反复冻融会影响产品性能。 

3. 本产品中含荧光染料SYBR Green I,使用中应尽量避免强光照射。 

4. 配制多个反应孔体系时,请为各组分预留10%的余量,以免移液损失。 

5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


 ►扩增曲线形状异常 

 ①扩增曲线不光滑:信号弱,可提高模板浓度重复实验;若重复后问题仍然存在则考虑八联排管或PCR板可能与设备不匹配, 设备光源可能松动。 

 ②扩增曲线突然骤降:反应管内留有气泡,样本离心后仔细检查反应管内是否有气泡残留。 

 ③扩增曲线断裂或下滑:模板浓度较高,基线的终点值大于CT值。减小基线终点(Ct值 - 4),重新分析数据。 

 ►Ct值异常 

 ①Ct值小于10,需要将模板稀释后,重新进行实验(每稀释一倍,Ct值增大1)。 

 ②Ct值30-35之间时,需要提高模板浓度,或者增大反应体系的体积,以提高扩增效率,保证结果分析的准确性。 

 ③Ct 值大于35时,检测结果不可信。 

 ►反应结束无扩增曲线出现 

 ①循环数不够:一般设置为40个循环。 

 ②确认程序中是否设置了信号采集步骤。 

 ③确认引物、模板是否降解。 

 ►阴性对照出现扩增 

 ①反应体系污染:更换新的Mix、水、引物重复实验。在超净工作台进行反应体系配置,减少气溶胶污染。 

 ②产生引物二聚体,配合溶解曲线进行分析。 

 ③使用含UDG/dUTP 防污染体系的扩增试剂。 

 ►溶解曲线出现多峰 

 ①引物设计不优:根据设计原则设计合成新的引物。 

 ②引物浓度太高:适当降低引物浓度。 

 ③cDNA 模板带有基因组污染:重新制备cDNA模板。 

 ►实验重复性差 

 ①加样体积失准:建议使用大体积加样以减少误差。 

 ②模板浓度太低:模板浓度越低,重复性越差,减少模板稀释倍数或增加模板体积。 

 ③反应体系未充分混匀:上机检测前将反应体系充分混匀后再离心。

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产品描述

▎产品简介 :


HSF Blue Universal SYBR qPCR Master Mix是使用SYBR Green I 嵌合荧光法进行qPCR的专用预混液,颜色为蓝色,方便加样指示。 预混液主要成分包括化学修饰的Hot Start Fast Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg2+、SYBR Green I和针对qPCR优化的预混Buffer。 其中Hot Start Fast Taq DNA Polymerase为一种新型的化学法修饰的热启动DNA聚合酶,具有特异性强、灵敏度高等特点, 可在宽广的定 量区域内获得良好的标准曲线,实验结果重复性好、可信度高。另外,预混液体系中添加了特殊ROX Reference Dye,适用于不同 qPCR 仪器,配置反应体系时只需加入引物和模板即可扩增。


▎产品组分 :


组分S121

2× HSF Blue Universal SYBR qPCR Master Mix

DNase-free Water

5×1 mL

5×1 mL

▎适用范围 :

本试剂用于DNA样本的扩增定量,可以扩增所有物种来源的DNA,样本类型可以是基因组DNA、cDNA、质粒DNA等。

▎实验案例 :

更稳定及更高的拷贝效率

以相同的小鼠肝组织逆转率的cDNA为模板,使用LianWei #S121、和市售其他Sybr试剂(进口标杆SupplierA、国产试剂SupplierB、C),按照各自说明书推荐程序进行q-PCR反应,通过对Ct 值统计分析,从结果 (图A) 中可以看出LianWei #S121 与 Supplier A 在相同的测试体系 (20μL) 下获得了较低的Ct值,且明显超过了Supplier B、C 等产品。(* p≦0.05)。


较高的扩增平台值

在相同模板和qPCR体系下,按照各自说明书推荐程序进行q-PCR反应, 对Amplification Curves进行分析 (图2), 结果显示,LianWei #S121与同类产品相比 (SupplierA、B、C),LianWei #S121 Sybr预混液灵敏度高,稳定扩增的同时荧光强度更强,轻松获得较高的平台值。


较平滑的溶解曲线

在相同模板和qPCR体系下,按照各自说明书推荐程序进行q-PCR反应, 通过对 Melting Peaks进行观察 (图3)发现LianWei #S121与同类产品 SupplierA 相比有着更为平滑的溶解曲线,且只有一单峰。 




▎产品优势 :


更灵敏、更稳定的拷贝效率:S121 与同类其他产品相比有着更小的Ct值,且组内差异更小


较高的扩增平台:与市售其他Sybr预混液相比, S121 可得到更高的扩增平台


更平滑的溶解曲线:S121 与同类其他产品相比溶解曲线更为平滑,且减少二聚体的产生,稳定性好,重复性好

▎储存条件 :

避光保存, - 30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。





使用说明

▎实验流程 :

1. 按下表配制qPCR反应体系

试剂体积

2× HSF Blue Universal SYBR qPCR Master Mix

Forward Primer (10μM)

Reverse Primer (10μM)

模板DNA/cDNA

DNase-free Water

10 μL

0.4 μL*

0.4 μL*

X μL#

up to 20 μL

* 通常引物终浓度为0.2 μM即可得到较好的扩增效果,若结果循环数不理想也可根据实际情况在0.1~1μM 间进行调整。

# 微量体积加样时误差大,建议模板稀释后再加入反应体系,可以有效提高实验的重复性;若未稀释cDNA原液,使用体积不应超过qPCR反应总体积 的 1/10。 

反应体系配好后,盖好反应盖,充分涡旋混匀,离心,避免产生气泡。

2. 按下列条件进行qPCR反应

快速程序: 

Stage
步骤温度
时间循环数
Stage1预变性95 ℃5 min
1
Stage2循环反应

95 ℃

60 ℃

2 Sec

20 Sec

40
Stage3溶解曲线仪器默认设置1



标准程序: 

Stage
步骤温度
时间循环数
Stage1预变性95 ℃5 min
1
Stage2循环反应

95 ℃

60 ℃

15 Sec

40 Sec

40
Stage3溶解曲线仪器默认设置1

*快速程序适合绝大多数扩增反应, 若模板复杂、结果不佳或目标扩增子超过200 bp推荐使用标准程序。


▎注意事项 :

1. 请于使用前确保产品完全解冻,彻底混匀后短暂离心,置于冰上备用。 

2. 反复冻融会影响产品性能。 

3. 本产品中含荧光染料SYBR Green I,使用中应尽量避免强光照射。 

4. 配制多个反应孔体系时,请为各组分预留10%的余量,以免移液损失。 

5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


FAQ

 ►扩增曲线形状异常 

 ①扩增曲线不光滑:信号弱,可提高模板浓度重复实验;若重复后问题仍然存在则考虑八联排管或PCR板可能与设备不匹配, 设备光源可能松动。 

 ②扩增曲线突然骤降:反应管内留有气泡,样本离心后仔细检查反应管内是否有气泡残留。 

 ③扩增曲线断裂或下滑:模板浓度较高,基线的终点值大于CT值。减小基线终点(Ct值 - 4),重新分析数据。 

 ►Ct值异常 

 ①Ct值小于10,需要将模板稀释后,重新进行实验(每稀释一倍,Ct值增大1)。 

 ②Ct值30-35之间时,需要提高模板浓度,或者增大反应体系的体积,以提高扩增效率,保证结果分析的准确性。 

 ③Ct 值大于35时,检测结果不可信。 

 ►反应结束无扩增曲线出现 

 ①循环数不够:一般设置为40个循环。 

 ②确认程序中是否设置了信号采集步骤。 

 ③确认引物、模板是否降解。 

 ►阴性对照出现扩增 

 ①反应体系污染:更换新的Mix、水、引物重复实验。在超净工作台进行反应体系配置,减少气溶胶污染。 

 ②产生引物二聚体,配合溶解曲线进行分析。 

 ③使用含UDG/dUTP 防污染体系的扩增试剂。 

 ►溶解曲线出现多峰 

 ①引物设计不优:根据设计原则设计合成新的引物。 

 ②引物浓度太高:适当降低引物浓度。 

 ③cDNA 模板带有基因组污染:重新制备cDNA模板。 

 ►实验重复性差 

 ①加样体积失准:建议使用大体积加样以减少误差。 

 ②模板浓度太低:模板浓度越低,重复性越差,减少模板稀释倍数或增加模板体积。 

 ③反应体系未充分混匀:上机检测前将反应体系充分混匀后再离心。

说明书下载

HSF Blue Universal SYBR qPCR Master Mix
目录号:S121

HSF Blue Universal SYBR qPCR Master Mix是使用SYBR Green I 嵌合荧光法进行qPCR的专用预混液,颜色为蓝色,方便加样指示。Hot Start Fast Taq DNA Polymerase为一种新型的化学法修饰的热启动DNA聚合酶,具有特异性强、灵敏度高等特点, 可在宽广的定量区域内获得良好的标准曲线,实验结果重复性好、可信度高。另外,预混液体系中添加了特殊ROX Reference Dye,适用于不同qPCR 仪器,配置反应体系时只需加入引物和模板即可扩增。
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