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FastScript First Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (with dsDNase)

【逆转录系列】 【两步法】

目录号：N112

FastScript First Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR（withdsDNase）是一款含有强力基因组去除组分的快速、 便捷的cDNA合成试剂盒。其中新一代逆转录酶FastScript Reverse Transcriptase 针对逆转录过程进一步优化， 50℃反应, 热稳定性强, 逆转效率显著提高。4×RT SuperMix中包含有cDNA合成所需的组分，仅需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应。使用本产品逆转录得到的cDNA可用于下游qPCR、普通PCR检测。

价 格 ￥720

FastScript First Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR （with dsDNase）

￥720

N112-100rxns

¥ 720

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产品描述 使用说明 FAQ 说明书下载

▎产品简介 ：


FastScriptFirstStrand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR（withdsDNase）是一款含有强力基因组去除组分的快速、 便捷的cDNA合成试剂盒。其中新一代逆转录酶FastScriptReverse Transcriptase 针对逆转录过程进一步优化， 50℃反应, 热稳定性强, 逆转效率显著提高。4×RT SuperMix中包含FastScript Reverse Transcriptase 及其反应的Buffer、RNase inhibitor、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和Random primers等所有cDNA合成所需的组分，仅需加入RNA模板和水即可进行逆 转录反应。使用本产品逆转录得到的cDNA可用于下游qPCR、普通PCR检测。


▎产品组分 ：


组分N112-100rxns

4× RT SuperMix

5× gDNA Eraser Mix

RNase-free Water

500 μL

2×100 μL

2×1 mL

▎实验案例 ：

更稳定及更高的逆转效率

以1 μg的动物组织RNA为模板，使用LianWei #N112、和市售其他逆转录试剂（进口标杆SupplierA、国产试剂SupplierB、C)，按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应，将得到的cDNA进行多个基因的qPCR定量分析，从图中可以看出LianWei #N112 在相同的测试体系下获得了较低的CT值，且明显超过了Supplier A、B、C 等逆转录产品。(* p≦0.05)。



▎产品优势 ：


更强力的基因组DNA去除：N112 使用两步法逆转录更好的去除基因组DNA


更高的逆转录效率：与市售其他逆转录试剂相比，N112 可得到更小的Ct值


更快、更稳定的反应体系：15 min即可完成逆转录反应，且稳定性好，重复性好

▎储存条件 ：

- 30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。



▎实验流程 ：

1. 基因组 DNA 去除

试剂体积

5× gDNA Eraser Mix

Total RNA

RNase-free Water

2 μL

≦ 1μg

up to 10 μL

用移液器轻轻吹打混匀，37℃反应 2min降解gDNA ，65℃反应 2min 灭活dsDNase, 置于冰上进行下一步。

2.配制 cDNA 合成反应体系

试剂体积

上一步混合液
4× RT SuperMix
RNase-free Water

10 μL

5 μL

up to 20 μL

使用移液器轻轻吹打混匀, 并进行瞬时离心。

3. 按下列条件进行cDNA 合成

温度时间

25℃

50℃*

85℃

5 min

15 min#

5 min

* 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域，可将反应温度提高到 55℃，有助于提高产量。 

# 如需获得更多逆转录产物，可将反应时间延长至30-45 min。

产物可立即用于qPCR反应，或在-20°C保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后于-70°C保存，应避免反复冻融。

▎注意事项 ：

1. 请于使用前确保产品完全解冻，彻底混匀后短暂离心，置于冰上备用。 

2. 反复冻融会影响产品的性能，影响逆转录效率。 

3. 应避免样品间交叉污染和气溶胶污染，同时使用RNase-free的离心管、枪头等耗材。 

4. 为保证您的安全和实验顺利，请保持实验区域洁净，操作时需穿戴干净的实验服、口罩、一次性手套。 

5. 本产品适用于含Poly(A)结构的真核生物mRNA，也适用于不含Poly(A)结构的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板的逆转录，但不适用于miRNA等小RNA模板的逆转录 

Q1：后续实验为PCR时，逆转录时间可以延长吗？ A1：后续实验为PCR时，cDNA的产量与反应时长有关，增加反应时间可以提升cDNA的产量。


Q2：后续实验为PCR时，反应温度为50℃？ A2： N112 中逆转录酶的适宜反应温度在37~55℃之间。针对全长cDNA的逆转，50℃有助于模板内复杂二级结构的打开。


Q3：对于逆转录加样的操作注意事项

A3：⑴ 4 × RT SuperMix、5 × gDNA Eraser Mix 含有高浓度的甘油，在使用前请短暂离心收集到反应管底部，并用移液枪轻轻吸打充分混匀后准确吸取。

⑵ 20 µl逆转录反应体系建议加入不超过1 µg的Total RNA。如果目的基因表达量非常低，最多加入5 µg total RNA，否则加入RNA量过高， 可能会超出后续定量PCR的线性范围。

⑶ 可以不进行基因组去除步骤，直接用逆转录试剂进行逆转录，但是请勿将 5 × gDNAEraserMix 与不含基因组去除模块的试剂配套使用（因为不含基因组去除模块的试剂盒中的Mix不含终止gDNA Eraser 反应的成分，有可能会影响cDNA稳定性。



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产品描述

▎产品简介 ：


FastScriptFirstStrand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR（withdsDNase）是一款含有强力基因组去除组分的快速、 便捷的cDNA合成试剂盒。其中新一代逆转录酶FastScriptReverse Transcriptase 针对逆转录过程进一步优化， 50℃反应, 热稳定性强, 逆转效率显著提高。4×RT SuperMix中包含FastScript Reverse Transcriptase 及其反应的Buffer、RNase inhibitor、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和Random primers等所有cDNA合成所需的组分，仅需加入RNA模板和水即可进行逆 转录反应。使用本产品逆转录得到的cDNA可用于下游qPCR、普通PCR检测。


▎产品组分 ：


组分N112-100rxns

4× RT SuperMix

5× gDNA Eraser Mix

RNase-free Water

500 μL

2×100 μL

2×1 mL

▎实验案例 ：

更稳定及更高的逆转效率

以1 μg的动物组织RNA为模板，使用LianWei #N112、和市售其他逆转录试剂（进口标杆SupplierA、国产试剂SupplierB、C)，按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应，将得到的cDNA进行多个基因的qPCR定量分析，从图中可以看出LianWei #N112 在相同的测试体系下获得了较低的CT值，且明显超过了Supplier A、B、C 等逆转录产品。(* p≦0.05)。



▎产品优势 ：


更强力的基因组DNA去除：N112 使用两步法逆转录更好的去除基因组DNA


更高的逆转录效率：与市售其他逆转录试剂相比，N112 可得到更小的Ct值


更快、更稳定的反应体系：15 min即可完成逆转录反应，且稳定性好，重复性好

▎储存条件 ：

- 30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。



使用说明

▎实验流程 ：

1. 基因组 DNA 去除

试剂体积

5× gDNA Eraser Mix

Total RNA

RNase-free Water

2 μL

≦ 1μg

up to 10 μL

用移液器轻轻吹打混匀，37℃反应 2min降解gDNA ，65℃反应 2min 灭活dsDNase, 置于冰上进行下一步。

2.配制 cDNA 合成反应体系

试剂体积

上一步混合液
4× RT SuperMix
RNase-free Water

10 μL

5 μL

up to 20 μL

使用移液器轻轻吹打混匀, 并进行瞬时离心。

3. 按下列条件进行cDNA 合成

温度时间

25℃

50℃*

85℃

5 min

15 min#

5 min

* 如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域，可将反应温度提高到 55℃，有助于提高产量。 

# 如需获得更多逆转录产物，可将反应时间延长至30-45 min。

产物可立即用于qPCR反应，或在-20°C保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后于-70°C保存，应避免反复冻融。

▎注意事项 ：

1. 请于使用前确保产品完全解冻，彻底混匀后短暂离心，置于冰上备用。 

2. 反复冻融会影响产品的性能，影响逆转录效率。 

3. 应避免样品间交叉污染和气溶胶污染，同时使用RNase-free的离心管、枪头等耗材。 

4. 为保证您的安全和实验顺利，请保持实验区域洁净，操作时需穿戴干净的实验服、口罩、一次性手套。 

5. 本产品适用于含Poly(A)结构的真核生物mRNA，也适用于不含Poly(A)结构的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板的逆转录，但不适用于miRNA等小RNA模板的逆转录 

FAQ

Q1：后续实验为PCR时，逆转录时间可以延长吗？ A1：后续实验为PCR时，cDNA的产量与反应时长有关，增加反应时间可以提升cDNA的产量。


Q2：后续实验为PCR时，反应温度为50℃？ A2： N112 中逆转录酶的适宜反应温度在37~55℃之间。针对全长cDNA的逆转，50℃有助于模板内复杂二级结构的打开。


Q3：对于逆转录加样的操作注意事项

A3：⑴ 4 × RT SuperMix、5 × gDNA Eraser Mix 含有高浓度的甘油，在使用前请短暂离心收集到反应管底部，并用移液枪轻轻吸打充分混匀后准确吸取。

⑵ 20 µl逆转录反应体系建议加入不超过1 µg的Total RNA。如果目的基因表达量非常低，最多加入5 µg total RNA，否则加入RNA量过高， 可能会超出后续定量PCR的线性范围。

⑶ 可以不进行基因组去除步骤，直接用逆转录试剂进行逆转录，但是请勿将 5 × gDNAEraserMix 与不含基因组去除模块的试剂配套使用（因为不含基因组去除模块的试剂盒中的Mix不含终止gDNA Eraser 反应的成分，有可能会影响cDNA稳定性。



说明书下载

FastScript First Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (with dsDNase)
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FastScript First Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR（withdsDNase）是一款含有强力基因组去除组分的快速、 便捷的cDNA合成试剂盒。其中新一代逆转录酶FastScript Reverse Transcriptase 针对逆转录过程进一步优化， 50℃反应, 热稳定性强, 逆转效率显著提高。4×RT SuperMix中包含有cDNA合成所需的组分，仅需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应。使用本产品逆转录得到的cDNA可用于下游qPCR、普通PCR检测。
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