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FastScript First Strand RT SuperMix for qPCR (with dsDNase)

【逆转录系列】 【一步法、两步法通用】

目录号：N113

FastScript First Strand RT SuperMix for qPCR（withdsDNase）是一款含有基因组去除的有效、便捷的cDNA合成试剂盒。其中新一代逆转录酶FastScript Reverse Transcriptase 针对逆转录过程进一步优化，50℃反应, 热稳定性强, 逆转效率显著提高。FastScript qRT SuperMix中包含cDNA合成所需的所有组分，仅需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应。使用本产品逆转录得到的cDNA可用于下游qPCR检测。

价 格 ￥820

FastScript First Strand RT SuperMix for qPCR （with dsDNase）

￥820

N113-100rxns

¥ 820

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产品描述 使用说明 FAQ 说明书下载

▎产品简介 ：


FastScript First Strand RT SuperMix for qPCR（withdsDNase）是一款含有有效去除基因组成分、操作便捷的cDNA合成试剂盒。其中新一代逆转录酶FastScript Reverse Transcriptase 针对逆转录过程进一步优化，50℃反应, 热稳定性强, 逆转 效率显著提高。FastScript qRT SuperMix中包含FastScript Reverse Transcriptase 及其反应的Buffer、RNase inhibitor、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和Random primers等cDNA合成所需的所有组分，仅需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应。使用本 产品逆转录得到的cDNA可用于下游qPCR检测。


▎产品组分 ：


组分N113-100rxns

FastScript qRT SuperMix 

dsDNase

10× dsDNase Buffer

RNase-free Water

400 μL

2×50 μL

200 μL

2×1 mL


▎适用范围：


本产品适用于动物、植物及微生物RNA模板的cDNA合成反应，不仅适用于含Poly(A)结构的真核生物mRNA，也适用于 不含Poly(A)结构的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板的逆转录，但不适用于miRNA等小RNA模板的逆转录, 经本产 品逆转录得到的产物可兼容下游的染料法qPCR检测和探针法qPCR检测


▎实验案例 ：

更稳定及更高的逆转效率

以1 μg的动物组织RNA为模板，使用LianWei #N113、和市售其他逆转录试剂（进口标杆SupplierA、国产试剂SupplierB、C、D)，按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应，将得到的cDNA进行多个基因的qPCR定量分析，从图中可以看出LianWei #N113 与 SupplierA 在相同的测试体系下都获得了更低的CT值, 且明显超过了Supplier B, C, D 等逆转录产品(* p≦0.05)。


▎产品优势 ：


更灵活的实验方案：N113 既可以使用一步法逆转录，同时也可以使用两步法逆转录更好的去除基因组DNA


更高的逆转录效率：与市售其他逆转录试剂相比，N113 可得到更小的Ct值


更快、更稳定的反应体系：15 min即可完成逆转录反应，且稳定性好，重复性好

▎储存条件 ：

- 30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。


▎实验流程 ：

⚫两步法逆转录流程(适用于基因组DNA含量较高的RNA样本)

1. 基因组 DNA 去除

试剂体积

dsDNase

5× dsDNase Buffer

Total RNA

RNase-free Water

2 μL

1 μL

≦ 1μg

up to 10 μL

用移液器轻轻吹打混匀，37℃反应 2min 降解 gDNA (若gDNA含量较高可延长至5min)，65℃反应 2min 灭活dsDNase， 置于冰上进行下一步。

2.配制 cDNA 合成反应体系

试剂体积

上一步混合液
FastScript qRT SuperMix
RNase-free Water

10 μL

4 μL

up to 20 μL

使用移液器轻轻吹打混匀, 并进行瞬时离心。

3. 按下列条件进行cDNA 合成

温度时间

50℃

85℃

15 min

5 min

当目标为不含Poly(A)结构的原核生物RNA时，需在首步进行25℃, 10min 的预孵育。


⚫一步法逆转录流程(适用于基因组DNA含量较低的RNA样本)

1. 基因组 DNA 去除

试剂体积

dsDNase

FastScript qRT SuperMix

Total RNA

RNase-free Water

1 μL

4 μL

≦ 1μg

up to 10 μL

使用移液器轻轻吹打混匀，并进行瞬时离心。

2. 按下列条件进行cDNA 合成

温度时间

37℃

50℃

85℃

2 min

15 min

5 min

产物可立即用于qPCR反应，或在-20°C保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后于-70°C保存，应避免反复冻融。


▎注意事项 ：

1. 请于使用前确保产品完全解冻，彻底混匀后短暂离心，置于冰上备用。

2. 反复冻融会影响产品的性能，影响逆转录效率。

3. 应避免样品间交叉污染和气溶胶污染，同时使用RNase-free的离心管、枪头等耗材。

4. 为保证您的安全和实验顺利，请保持实验区域洁净，操作时需穿戴干净的实验服、口罩、一次性手套。

5. 20 μL逆转录体系中建议Total RNA的加入量不超过1 μg，若加入RNA过量，可能会抑制逆转录反应; 同时建议Total RNA的加入量不少于超过50 ng。


Q1：后续实验为PCR时，逆转录时间可以延长吗？ A1：后续实验为PCR时，cDNA的产量与反应时长有关，N113 可以在15min合成cDNA片段，增加反应时间可以提升cDNA的产量。   Q2：后续实验为PCR时，反应温度为50℃？ A2：N113 中逆转录酶的适宜反应温度在37~55℃之间。针对全长cDNA的逆转，50℃有助于模板内复杂二级结构的打开。

暂无评价

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产品描述

▎产品简介 ：


FastScript First Strand RT SuperMix for qPCR（withdsDNase）是一款含有有效去除基因组成分、操作便捷的cDNA合成试剂盒。其中新一代逆转录酶FastScript Reverse Transcriptase 针对逆转录过程进一步优化，50℃反应, 热稳定性强, 逆转 效率显著提高。FastScript qRT SuperMix中包含FastScript Reverse Transcriptase 及其反应的Buffer、RNase inhibitor、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和Random primers等cDNA合成所需的所有组分，仅需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应。使用本 产品逆转录得到的cDNA可用于下游qPCR检测。


▎产品组分 ：


组分N113-100rxns

FastScript qRT SuperMix 

dsDNase

10× dsDNase Buffer

RNase-free Water

400 μL

2×50 μL

200 μL

2×1 mL


▎适用范围：


本产品适用于动物、植物及微生物RNA模板的cDNA合成反应，不仅适用于含Poly(A)结构的真核生物mRNA，也适用于 不含Poly(A)结构的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板的逆转录，但不适用于miRNA等小RNA模板的逆转录, 经本产 品逆转录得到的产物可兼容下游的染料法qPCR检测和探针法qPCR检测


▎实验案例 ：

更稳定及更高的逆转效率

以1 μg的动物组织RNA为模板，使用LianWei #N113、和市售其他逆转录试剂（进口标杆SupplierA、国产试剂SupplierB、C、D)，按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应，将得到的cDNA进行多个基因的qPCR定量分析，从图中可以看出LianWei #N113 与 SupplierA 在相同的测试体系下都获得了更低的CT值, 且明显超过了Supplier B, C, D 等逆转录产品(* p≦0.05)。


▎产品优势 ：


更灵活的实验方案：N113 既可以使用一步法逆转录，同时也可以使用两步法逆转录更好的去除基因组DNA


更高的逆转录效率：与市售其他逆转录试剂相比，N113 可得到更小的Ct值


更快、更稳定的反应体系：15 min即可完成逆转录反应，且稳定性好，重复性好

▎储存条件 ：

- 30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。


使用说明

▎实验流程 ：

⚫两步法逆转录流程(适用于基因组DNA含量较高的RNA样本)

1. 基因组 DNA 去除

试剂体积

dsDNase

5× dsDNase Buffer

Total RNA

RNase-free Water

2 μL

1 μL

≦ 1μg

up to 10 μL

用移液器轻轻吹打混匀，37℃反应 2min 降解 gDNA (若gDNA含量较高可延长至5min)，65℃反应 2min 灭活dsDNase， 置于冰上进行下一步。

2.配制 cDNA 合成反应体系

试剂体积

上一步混合液
FastScript qRT SuperMix
RNase-free Water

10 μL

4 μL

up to 20 μL

使用移液器轻轻吹打混匀, 并进行瞬时离心。

3. 按下列条件进行cDNA 合成

温度时间

50℃

85℃

15 min

5 min

当目标为不含Poly(A)结构的原核生物RNA时，需在首步进行25℃, 10min 的预孵育。


⚫一步法逆转录流程(适用于基因组DNA含量较低的RNA样本)

1. 基因组 DNA 去除

试剂体积

dsDNase

FastScript qRT SuperMix

Total RNA

RNase-free Water

1 μL

4 μL

≦ 1μg

up to 10 μL

使用移液器轻轻吹打混匀，并进行瞬时离心。

2. 按下列条件进行cDNA 合成

温度时间

37℃

50℃

85℃

2 min

15 min

5 min

产物可立即用于qPCR反应，或在-20°C保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后于-70°C保存，应避免反复冻融。


▎注意事项 ：

1. 请于使用前确保产品完全解冻，彻底混匀后短暂离心，置于冰上备用。

2. 反复冻融会影响产品的性能，影响逆转录效率。

3. 应避免样品间交叉污染和气溶胶污染，同时使用RNase-free的离心管、枪头等耗材。

4. 为保证您的安全和实验顺利，请保持实验区域洁净，操作时需穿戴干净的实验服、口罩、一次性手套。

5. 20 μL逆转录体系中建议Total RNA的加入量不超过1 μg，若加入RNA过量，可能会抑制逆转录反应; 同时建议Total RNA的加入量不少于超过50 ng。


FAQ

Q1：后续实验为PCR时，逆转录时间可以延长吗？ A1：后续实验为PCR时，cDNA的产量与反应时长有关，N113 可以在15min合成cDNA片段，增加反应时间可以提升cDNA的产量。   Q2：后续实验为PCR时，反应温度为50℃？ A2：N113 中逆转录酶的适宜反应温度在37~55℃之间。针对全长cDNA的逆转，50℃有助于模板内复杂二级结构的打开。

说明书下载

FastScript First Strand RT SuperMix for qPCR (with dsDNase)
目录号：N113

FastScript First Strand RT SuperMix for qPCR（withdsDNase）是一款含有基因组去除的有效、便捷的cDNA合成试剂盒。其中新一代逆转录酶FastScript Reverse Transcriptase 针对逆转录过程进一步优化，50℃反应, 热稳定性强, 逆转效率显著提高。FastScript qRT SuperMix中包含cDNA合成所需的所有组分，仅需加入RNA模板和水即可进行逆转录反应。使用本产品逆转录得到的cDNA可用于下游qPCR检测。
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