目录号：N114

FastScript Ⅳ First Strand cDNA Synthesis Kit（with dsDNase）是一款含有基因组去除组分的cDNA 合成试剂盒，可有效去除 RNA 中的 gDNA 污染。FastScript Ⅳ Reverse Transcriptase 具有很强的逆转率活性和较快的逆转率速率，可以快速完成 15Kb 的长片段 cDNA 的逆转录, 使用时只需要根据下游实验选择合适的逆转录引物。

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N114-100rxns

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▎产品简介：

FastScript Ⅳ First Strand cDNA Synthesis Kit（with dsDNase）是一款含有基因组去除组分的cDNA 合成试剂盒，可高效去除 RNA 中的 gDNA 污染。FastScript Ⅳ Reverse Transcriptase 具有很强的逆转率活性和较快的逆转率速率，可以快速完成 15Kb 的长片段 cDNA 的逆转录, 使用时只需要根据下游实验选择合适的逆转录引物。

▎产品组分：

组分

N114-50rxns

N114-100rxns

5× gDNA Eraser Mix

5× RT Buffer

10× FastScript IV Mix

Oligo(dT)₂₃VN Primer (50μM)

Random Primers (50μM)

RNase-free Water

100 μL

200 μL

100 μL

50 μL

1 mL

2×100 μL

400 μL

200 μL

100 μL

2×1 mL

▎实验案例：

更稳定及更高的逆转效率

以1 μg的动物组织RNA为模板，使用LianWei #N114、和市售其他逆转录试剂（进口标杆SupplierA、国产试剂SupplierB)，按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应，将得到的cDNA进行多个基因的qPCR定量分析，从图中可以看出LianWei #N114 与 SupplierA 在相同的测试体系下都获得了更低的CT值，且超过了SupplierB逆转录产品。

▎产品优势：

更强的延伸能力：N114 逆转后可扩增出长达15 kb的长片段cDNA

更高的逆转录效率：与市售其他逆转录试剂相比，N114 可得到更小的Ct值

更快、更稳定的反应体系：15 min即可完成逆转录反应，且稳定性好，重复性好

▎储存条件：

- 30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。

▎实验流程：

1. 基因组 DNA 去除

试剂

体积

5× gDNA Eraser Mix

Total RNA

RNase-free Water

2 μL

≦ 1μg

up to 10 μL

用移液器轻轻吹打混匀，37℃反应 2min 降解 gDNA， 55℃反应 5min 灭活dsDNase，置于冰上进行下一步。

2.配制 cDNA 合成反应体系

试剂

体积

上一步混合液

Oligo(dT)23VN Primer (50μM)

or Random Primers (50μM)

or Gene Specific Primers(2μM)

5× RT Buffer

10× FastScript IV Mix

RNase-free Water

10 μL

1 μL*

4 μL

2 μL

up to 20 μL

*下游qPCR反应推荐 Oligo d(T)23 VN Primer 与 Random Primers 各1 μL同时使用; 真核生物模板推荐使用 Oligo(dT)23VN Primer; 原核生物模板或目标区域具有复杂二级结构或高 GC 区域推荐使用 Random Primers。

使用移液器轻轻吹打混匀。

3. 按下列条件进行第一链cDNA 合成

温度

时间

25℃

50℃*

85℃

5 min

15 min#

5 min

*如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域，可将反应温度提高到 55℃，有助于提高产量。

*如需获得更多逆转录产物，可将反应时间延长至30-45 min。

产物可立即用于qPCR反应，或在-20°C保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后于-70°C保存，应避免反复冻融。

▎注意事项：

1. 请于使用前确保产品完全解冻，彻底混匀后短暂离心，置于冰上备用。

2. 反复冻融会影响产品的性能，影响逆转录效率。

3. 应避免样品间交叉污染和气溶胶污染，同时使用RNase-free的离心管、枪头等耗材。

4. 为保证您的安全和实验顺利，请保持实验区域洁净，操作时需穿戴干净的实验服、口罩、一次性手套。

Q1：后续实验为PCR时，逆转录时间可以延长吗？ A1：后续实验为PCR时，cDNA的产量与反应时长有关，N114 可以在15min合成15kb的cDNA片段，增加反应时间可以提升cDNA的产量。 Q2：后续实验为PCR时，反应温度为50℃？ A2：N114 中逆转录酶的适宜反应温度在37~55℃之间。针对全长cDNA的逆转，50℃有助于模板内复杂二级结构的打开。

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产品描述

▎产品简介：

▎产品组分：

组分

N114-50rxns

N114-100rxns

5× gDNA Eraser Mix

5× RT Buffer

10× FastScript IV Mix

Oligo(dT)₂₃VN Primer (50μM)

Random Primers (50μM)

RNase-free Water

100 μL

200 μL

100 μL

50 μL

1 mL

2×100 μL

400 μL

200 μL

100 μL

2×1 mL

▎实验案例：

更稳定及更高的逆转效率

▎产品优势：

更强的延伸能力：N114 逆转后可扩增出长达15 kb的长片段cDNA

更高的逆转录效率：与市售其他逆转录试剂相比，N114 可得到更小的Ct值

更快、更稳定的反应体系：15 min即可完成逆转录反应，且稳定性好，重复性好

▎储存条件：

- 30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。

使用说明

▎实验流程：

1. 基因组 DNA 去除

试剂

体积

5× gDNA Eraser Mix

Total RNA

RNase-free Water

2 μL

≦ 1μg

up to 10 μL

用移液器轻轻吹打混匀，37℃反应 2min 降解 gDNA， 55℃反应 5min 灭活dsDNase，置于冰上进行下一步。

2.配制 cDNA 合成反应体系

试剂

体积

上一步混合液

Oligo(dT)23VN Primer (50μM)

or Random Primers (50μM)

or Gene Specific Primers(2μM)

5× RT Buffer

10× FastScript IV Mix

RNase-free Water

10 μL

1 μL*

4 μL

2 μL

up to 20 μL

使用移液器轻轻吹打混匀。

3. 按下列条件进行第一链cDNA 合成

温度

时间

25℃

50℃*

85℃

5 min

15 min#

5 min

*如果模板具有复杂二级结构或高 GC 区域，可将反应温度提高到 55℃，有助于提高产量。

*如需获得更多逆转录产物，可将反应时间延长至30-45 min。

产物可立即用于qPCR反应，或在-20°C保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后于-70°C保存，应避免反复冻融。

▎注意事项：

1. 请于使用前确保产品完全解冻，彻底混匀后短暂离心，置于冰上备用。

2. 反复冻融会影响产品的性能，影响逆转录效率。

3. 应避免样品间交叉污染和气溶胶污染，同时使用RNase-free的离心管、枪头等耗材。

4. 为保证您的安全和实验顺利，请保持实验区域洁净，操作时需穿戴干净的实验服、口罩、一次性手套。

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