▎使用方法:
v 制作标准曲线
1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞;
2. 按比例依次用培养基等比稀释细胞,一般要做5-7个细胞浓度梯度,每组4-6个复孔;
3. 接种后培养贴壁细胞或悬浮细胞0.5-4 h,每100μL培养基加10μL CCK-8试剂,培养一定时间后测定OD450值,制作出一条以细胞数量为横坐标,OD450值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致。
v 细胞活性检测
1. 在96孔板中接种细胞悬液(100 μL/孔),将板在培养箱中预先培养;
2. 在每孔中加入10μL CCK-8溶液,注意不要将气泡引入孔中,因为它们会干扰OD值读取;
3. 在培养箱中将平板孵育0.5-4 h;时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定;
4. 使用酶标仪测量450nm处的吸光度。
v 细胞增殖/毒性检测方案
1. 在96孔板中接种100μL细胞悬液(5,000个细胞/孔),将板在培养箱中预培养24 h;
2. 在平板中加入1-10μL各种浓度的待测物质;
3. 在培养箱中将平板孵育适当的时间(例如 6、12、24 或 48 h);
4. 向板的每个孔中加入10μL CCK-8溶液,注意不要引入气泡,因为它们会干扰OD值读取;
5. 在培养箱中将平板孵育0.5-4 h;时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定;
6. 使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。
v 结果计算
细胞存活率=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]×100%
抑制率=[(Ac-As)/(Ac-Ab)]×100%
As:实验孔吸光度(含细胞、培养基、CCK-8溶液和药物溶液);
Ac:对照孔吸光度(含细胞、培养基、CCK-8溶液,不含药物);
Ab:空白孔吸光度(含培养基、CCK-8溶液,不含细胞、药物)。
▎注意事项 :
1. CCK-8对细胞的毒性相当低,因此细胞在CCK-8法检测后还可用于其他后续分析。
2. 如果OD值太低,可以采取适当增加细胞数量或者延长加入CCK-8后的孵育时间的办法。
3. 试剂盒依赖于脱氢酶催化的反应,影响活细胞中脱氢酶活性的条件或化学物质如还原剂会干扰检测。如果由于长期培养而改变了培养基的颜色或pH,请在添加CCK-8时更换培养基。