WB实验里的'隐形门槛':你的胶,决定了你的条带?
做Western Blot的人大概都有过这样的体验:
制胶、跑胶、转膜、封闭、抗体孵育……每一步都小心翼翼,可到了最后显影,条带还是歪的、糊的、微笑的。回头排查半天,问题往往出在最不起眼的地方——
那块被你'随手'灌出来的聚丙烯酰胺凝胶。
今天我们就来聊聊:一块好胶是怎么诞生的,以及为什么越来越多的实验室开始用'一步法制胶液'。


第一种 传统SDS-PAGE胶
采用自配的SDS-PAGE胶是大部分实验室的传统操作,使用Acr-Bis、Tris-HCl、SDS、APS以及TEMED溶液自己配制。其优点是分离胶浓度可以随实验需求进行调整,且成本低。但烦心事也很多:配制试剂成分复杂、试剂要不同温度分开储存,各个组分挨个加很麻烦,APS容易失效,TEMED有毒,配完下层胶还得等胶凝固才能加上层胶等。最头疼的是自配胶往往都是透明浓缩胶,灌完之后分离胶与浓缩胶之间的分界线几乎看不见,点样全靠感觉,一不小心就戳孔、串样,新手很容易翻车。
第二种 预制胶
预制胶通常是整盒售卖,盒内分块密封包装,买回来拆开就能用,不用自己配,批次稳定,节约时间。但缺点是价格偏高,通常一盒预制胶价格在几十到几百元不等,且预制胶的上层胶同样是透明的,上样孔肉眼分不清,点样的时候心里没底;通常预制胶对运输、保存条件也有要求。
第三种 一步法快速制胶试剂盒
这款胶是针对传统制胶缺点研发的快速配胶试剂盒,不需要配制一堆母液,预混的分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液,只需要1:1混匀,加上促凝剂就可以灌胶,且加完下层胶无需压线即可加上层胶。最实用的一点是上层胶带颜色,分界清楚,上样孔一眼就能看清,也不用盲点样,大大减少错孔、漏样。不用整套囤预制胶,可以按需配胶,兼顾灵活度;胶的分离效果稳定,条带清晰,普通电泳缓冲液就能直接用。


联纬生物一步法制胶液试剂盒
联纬生物研制的One-Step PAGE Gel Fast Preparation Kit 是专为聚丙烯酰胺凝胶的快速制备而设计。试剂盒采用上层胶与下层胶预混配方,仅需加入改良型促凝剂即可引发聚合。灌制下层胶后无需液封或等待,即可直接灌注上层胶,操作简便快捷。上层胶预染有颜色,点样孔清晰易辨,便于加样及区分不同凝胶。配套的改良型促凝剂 APS 稳定性好、促凝高效,配胶全程无需添加TEMED。每套试剂可配制 125 块 mini PAGE 胶(以 0.75 mm 厚度计),所制凝胶既适用于变性电泳,也适用于非变性 PAGE 电泳,应用灵活,物美价廉。
SDS-PAGE电泳的原理就是SDS给蛋白质穿上均匀的'负电荷外衣',在电场中穿过凝胶孔隙,小分子跑得快,大分子跑得慢,于是混合物按大小分离开。
原理听起来简单,但WB实验凝胶本身才是这一切的地基:
孔隙要均匀——不然条带会扭曲、微笑
聚合要彻底——残留单体或梯度不均会导致拖尾
浓度要匹配——20 kDa的小蛋白用6%的胶,大概率跑出胶外;200 kDa的大蛋白用15%的胶,可能原地不动
WB实验如果地基不稳,后面转膜、抗体验证做得再漂亮,也好比是在沙滩上盖楼----易倒。

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