蛋白互作哪家强？邻近标记来帮忙

1. 临近标记技术原理介绍

临近标记技术允许与靶蛋白融合表达的标记酶在融合蛋白的附近空间区域，标记短暂、持续靶标蛋白附近的猎物蛋白分子，使之将已知的反应基团共价连接到附近的蛋白质上，从而利用反应基团的纯化方式捕捉猎物蛋白。TurboID 是一种工程生物素连接酶，它使用 ATP 将生物素转化为生物素-AMP，形成共价标记近端蛋白质的反应性中间体。定向进化优化后的TurboID 具有更高的标记活性(从18hrs缩短至10min)，从而实现更高的时间分辨率和更广泛的体内应用。可将TurboID生物素化的蛋白质然后用链霉亲和素珠进行富集，并通过质谱法进行鉴定。

2. 传统AP-MS或酵母双杂交技术的弊端

① cDNA文库的污染或生物大分子抗体的非特异性造成AP-MS信噪比大或假阳性；

② 酵母为最低级的真核生物，缺乏蛋白翻译后修饰系统，与体内的真实互作景观相差较大；

③ 二者均无法实现蛋白空间动态变化引起的猎物蛋白捕捉。

3. TurboID邻近标记技术的特点

① 在更加生理的状态下捕获与诱饵蛋白互作的蛋白种类或大分子复合体

② 利用生物素-链霉亲和素的非共价结合，允许使用强去垢剂洗涤样品，提高信噪比

③ 即便瞬时互作蛋白发生位移，但其仍保留生物素化的特性，因此TurboID可实现瞬时互作景观，可实现更高的时间辨别和空间辨别互作的体内应用。

4. TurboID邻近标记技术的应用

① 研究蛋白-蛋白相互作用

② 重新审视、筛选功能蛋白互作景观

③ 弱相互作用或瞬时相互作用的筛选（如寻找翻译后修饰的底物）

④ 揭示病原入侵、复制及免疫逃逸机理

服务周期：

根据细胞生长特性与蛋白特性不同，服务周期在6～8周

服务流程：

客户提供：

靶细胞及其培养方案、诱饵蛋白序列信息。

交付标准：

① 项目结题报告

② 蛋白洗脱液银染胶图

③ 质谱下机及分析数据

④ PPI蛋白互作网络图（常见物种）

服务保证：

① 项目启动后，密切跟进实验进展，每两周进行一次项目进度汇报。

② 项目结题报告包含靶基因载体构建、实验详细记录、质谱结果及分析等，满足客户后期论证材料需求。

③ 终身售后。

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