联纬生物-细胞增殖检测（CCK8法）-北京联纬科技发展有限公司

从受精卵到万亿细胞的人体，从伤口愈合到肿瘤失控——细胞增殖是生命最基础也最精密的过程。每一次细胞分裂，都是一场被严格调控的'生命接力'。

当增殖失控，癌症随之而来；当增殖不足，组织修复受阻。精准检测细胞增殖状态，是解锁疾病机制、筛选治疗药物的关键钥匙。

今天，联纬生物带你一文读懂细胞增殖检测的五大维度，选对方法，让实验数据更可靠！

1.什么是细胞增殖？

细胞增殖是指细胞通过分裂产生子代细胞，使细胞数目增加的过程。其中有丝分裂是最常见的是增殖方式，包括DNA复制和细胞质分裂，最终产生两个基因组完全相同的子细胞。它是生物体生长、发育、组织修复和维持稳态的基础生命活动。

2.细胞增殖检测方法

细胞计数法

细胞计数是检测增殖最直接的方法，通过显微镜下人工计数或使用自动化细胞计数仪（如台盼蓝染色排斥法，计算单位体积或面积内的细胞数量。其特点是直观且简便，适用于各种细胞类型。

代谢活性检测

活细胞的线粒体代谢能力较强，可以将一些还原染料（如MTT、CCK-8、XTT、MTS及SRB）代谢为有色物质，其显色深度（或吸光度）与活细胞数量呈正比。通过分光光度计或酶标仪测量吸光值，可反映细胞增殖和代谢活性。

2.1 MTT法：MTT是一种黄色水溶性四唑盐，在代谢正常的活细胞中被还原生成蓝紫色甲臜结晶。检测时需先吸弃培养基，加入DMSO溶解甲臜，在490nm波长下检测OD值。

2.2 CCK-8法：相比于MTT法，CCK-8法在操作简便性、灵敏度、兼容性和细胞毒性等方面有所改进。CCK-8试剂盒含水溶性的四唑盐WST-8，可在活细胞中被还原为水溶性橙黄色甲臜产物，无需额外的溶解步骤，用酶标仪在450nm波长处检测其OD值即可。

DNA合成检测

细胞增殖期间会伴随DNA的合成，利用胸苷类似物（如EdU或BrdU）替代胸苷T被DNA复制活跃的细胞摄取并整合入新合成的DNA链中。通过特异性抗体或荧光染料检测这些标记物，即可识别并量化正在增殖的细胞。

3.1 EdU染色：EdU（5-乙炔脱氧尿嘧啶）是一种T类似物，掺入复制中的DNA后用含有叠氮基团的荧光染料进行特异性标记，随后通过荧光显微镜或流式细胞仪观察分析。该方法特异性强、灵敏度高、对细胞影响较低，实验流程简单且可以兼容多色荧光标记。

3.2 BrdU染色：BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）也是T类似物，它的结构中包含一个溴原子取代了T的甲基基团。BrdU与细胞共孵育一段时间后，将DNA固定并变性，使用BrdU特异性一抗和荧光标记二抗进行反应后观察荧光比例。BrdU染色操作流程相对复杂，可能对细胞造成损伤及非特异性结合。

细胞周期检测

细胞周期各时相的DNA 含量不同，通常正常细胞的G1/ G0 期具有二倍体细胞的DNA含量(2N) ，而 G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ，S期的DNA 含量介于二倍体和四倍体之间。PI(碘化丙啶)为插入性核酸荧光染料，能选择性嵌入核酸DNA和RNA双螺旋的碱基之间与之结合，结合量与DNA的含量成正比关系，其荧光强度直接能反映细胞内DNA含量。因此,通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0 期，S 期和G2/M 期，获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。流式分析可同时获得G1/S/G2/M各期比例、多参数分析。

细胞增殖相关标志物

细胞增殖标志物通常是仅在细胞分裂期表达而G0期不表达的蛋白，目前最常用的标志物有Ki-67、PCNA和MCM-2，均可通过qPCR、Western Blot或免疫荧光等方法检测。

活细胞追踪

钙化素-AM染色活细胞时具有强烈绿色荧光，而CFDA-SE荧光染料进入细胞后被胞内酯酶激活，随细胞分裂荧光强度逐代稀释，可追踪多代细胞分裂、适用于体内/体外长期实验。

3.如何选择检测方法

4.联纬生物增殖检测产品

产品编号：ZZ106

目前已验证多种细胞：HEK293, HeLa, CHO, MCF-7, HepG2, COS-7, RAW264.7, L929, HUVEC, SW-480, A549, hMSC, Hep3B, SK-OV-3, AE-1, MDCK, BEAS-2B, Vero, NIH-3T3, A431, PC-12, Chang liver, Jurkat, A-375, A2058, C2C12, DU-145, 769-P, HK-2, U-87MG, U251, Raji, Siha, Saos-2，检测准确率高。

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