联纬生物--凋亡检测试剂盒

细胞凋亡（Apoptosis）是一种程序性细胞死亡的核心形式，是评估疾病机制与治疗响应的'黄金指标'。在细胞生物学研究领域，细胞凋亡一直是热门话题，包括肿瘤免疫治疗、靶向药物、神经退行性疾病研究……几乎所有前沿领域都离不开精准的凋亡检测。

一、Annexin V/PI 双染法

检测原理：Annexin V 是一种分子量约35-36 kDa的Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白，对磷脂酰丝氨酸（ PS）具有高度亲和力。在正常活细胞中，PS 严格分布于细胞膜内侧（胞质面）；细胞凋亡早期，细胞膜不对称性丧失，PS 从内侧翻转到外侧。Annexin V 与外翻的 PS 结合，从而标记早期凋亡细胞。PI（碘化丙啶）是一种核酸染料，不能透过完整细胞膜，仅进入细胞膜完整性受损的晚期凋亡或坏死细胞，与DNA结合后发出红色荧光。

检测靶点：磷脂酰丝氨酸（PS）外翻 

适用阶段：凋亡早期

优点：

✅ 金标准方法，可区分 活细胞 / 早期凋亡 / 晚期凋亡 / 坏死细胞 四种群体

✅ 流式细胞术定量分析，结果客观、可重复

✅ 多种荧光标记可选（FITC、PE、APC、Alexa Fluor系列），灵活组合多色panel

✅ 操作相对简便，检测通量高，适合药物筛选

缺点：

❌ 无法区分凋亡与坏死晚期（两者均PI⁺）

❌ 机械损伤或酶消化可能导致假阳性PS外翻

❌ 需要Ca²⁺参与，某些缓冲液条件可能影响结合效率

❌ 不能提供凋亡机制信息（内在/外在通路）

二、JC-1 / TMRE 线粒体膜电位检测

检测原理：JC-1 是一种阳离子型碳菁染料，具有电位依赖性积聚特性。在正常线粒体中（高膜电位，ΔΨm），JC-1 形成 J-聚集体，发出红色荧光（~590 nm）；当线粒体膜电位下降（凋亡早期/中期），JC-1 以单体形式分散在胞质中，发出绿色荧光（~529 nm）。通过红/绿荧光比值变化定量评估线粒体膜电位状态。TMRE（四甲基罗丹明乙酯）原理类似，但仅产生红色荧光，膜电位下降时荧光减弱。

检测靶点：线粒体膜电位（ΔΨm）

适用阶段：凋亡中期

优点：

✅ 捕捉凋亡的'上游信号'，比Annexin V更早发现细胞命运改变

✅ 红绿荧光转换直观可视，结果易于判读

✅ 可区分内在通路与外在通路诱导的凋亡

✅ 适用于荧光显微镜、流式细胞仪、酶标仪等多种平台

✅ 是药物毒性早期预警的敏感指标

缺点：

❌ 线粒体膜电位变化并非凋亡特异性（缺氧、营养剥夺等也可导致）

❌ 需要严格控制孵育时间和染料浓度，过度加载可能导致毒性

❌ 荧光淬灭较快，需及时检测

❌ 不能区分凋亡与坏死（两者均可出现膜电位下降）

三、Caspase 酶活检测

检测原理：Caspase 家族半胱氨酸蛋白酶是凋亡执行的'分子剪刀'。Caspase-8/10 主要参与外在通路（死亡受体激活），Caspase-9 参与内在通路（线粒体释放细胞色素c），Caspase-3/7 是共同执行者，负责切割关键底物导致细胞形态学和生化改变。

检测方法包括：

（1）荧光底物法：使用细胞可渗透的荧光底物（如FAM-DEVD-FMK针对Caspase-3/7），Caspase切割后释放荧光基团

（2）免疫荧光/流式：使用特异性抗体检测活化Caspase的暴露新表位

（3）Western Blot：检测活化片段（如Cleaved Caspase-3 p17/p19）

检测靶点：

Caspase-3/7 活性 — 凋亡执行的核心标志

Caspase-8 活性 — 外在通路激活标志

Caspase-9 活性 — 内在通路激活标志

适用阶段：凋亡执行期

优点：

✅ 直接反映凋亡分子机制，特异性极高（Caspase激活是凋亡的生化定义）

✅ 可区分内在通路 vs 外在通路，深入机制研究

✅ 活细胞实时检测，可动态监测凋亡进程

✅ 结果可量化，适合高通量筛选

✅ 与形态学方法联合使用，证据链更完整

缺点：

❌ Caspase激活后细胞可能仍处于可逆阶段（'点 of no return' 难以精确定义）

❌ 某些非凋亡性细胞死亡（如焦亡、坏死性凋亡）也涉及Caspase

❌ 荧光底物可能抑制Caspase活性（底物本身为竞争性抑制剂）

❌ 需要针对不同Caspase分别检测，成本较高

❌ 组织样本检测较困难（酶活性易降解）

四、TUNEL 法

检测原理：凋亡晚期，活化Caspase激活CAD（Caspase-Activated DNase）或其抑制剂ICAD降解，导致DNA被系统性切割为180-200 bp整数倍的片段，产生大量3'-OH末端。TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP Nick End Labeling）利用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT），在无需模板的情况下将标记的dUTP（如FITC-dUTP、Biotin-dUTP）添加到断裂DNA的3'-OH末端，通过荧光或显色方法标记凋亡细胞。

检测靶点：DNA 3'-OH末端

适用阶段：凋亡晚期

优点：

✅ 灵敏度极高，单细胞水平即可检测

✅ 原位定位能力，可精确定位组织切片中的凋亡细胞（如肿瘤组织、神经组织）

✅ 支持多种样本类型：细胞涂片、爬片、悬浮细胞、石蜡切片、冰冻切片

✅ 多色荧光标记可选（FITC / 488 / 555 / 594 / 647），适配多色免疫荧光

✅ 一步法操作简化，结果稳定可靠

缺点：

❌ 坏死细胞DNA断裂也可被标记（需结合形态学或Annexin V区分）

❌ 细胞增殖过程中DNA修复产生的切口可能导致假阳性

❌ 固定和通透条件要求严格，过度处理可能导致DNA人为断裂

❌ 定量能力较弱（荧光强度与断裂程度非线性关系）

❌ 检测时间窗口较晚，不适合早期凋亡监测

那么问题来了——

若是如此，是时候升级你的凋亡检测方案了！联纬生物为您“排忧解难”来啦！！！

产品编码：D2010

应用场景：荧光酶标仪、荧光显微镜、流式细胞仪；

适用样本：贴壁细胞，悬浮细胞，石蜡包埋组织切片，冰冻切片

荧光信号通道：FITC 绿色通道（Ex/Em=490 nm/520 nm）

产品编码：D2011

应用场景：荧光酶标仪、荧光显微镜、流式细胞仪；

适用样本：贴壁细胞，悬浮细胞，石蜡包埋组织切片，冰冻切片；

荧光信号通道：PE 红色通道（Ex/Em=555 nm/565 nm）