▎产品简介 ：
BCA 蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Quantification Kit)，是目前灵敏度最高的蛋白质浓度测定方法之一。碱性条件下，蛋白将 Cu2+还原为 Cu+， Cu+与 BCA 试剂形成紫蓝色的络合物，测定其在562nm 处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂 SDS，Triton X-100，Tween 不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA, EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。
▎产品组分 ：
| 组分 | WN303-500rxns | WN303-2500rxns |
BCA Reagent A BCA Reagent B BSA 标准品（5mg/mL） |
100 mL 2 x 1.5 mL 1 mL | 500 mL 15 mL 4 x 1.5 mL |
▎适用范围 ：
本品检测灵敏度高，检测浓度下限达到 25µg/ml，最小检测蛋白量达到 0.5µg，待测样品体 积为 1-20µl。通常在 50-2000µg/ml 浓度范围内有较好的线性关系。
BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达 5%的 SDS， 5%的 Triton X-100，5%的 Tween20、60 等。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影 响，需确保 EDTA 低于 10mM，无 EGTA，二硫苏糖醇低于 1mM，β-巯基乙醇低于 0.07%。
▎产品验证 ：
图1. 本试剂盒蛋白标准曲线的效果图。左上图为加入BCA工作液后37℃分别孵育10、20和30分钟后的吸光度实测效果图，右图为37℃孵育30分钟时的实拍显色效果图。图中数据仅供参考，实际的检测效果可能会略有不同。
▎储存条件 ：
试剂 A, B 室温保存；蛋白标准品-20℃保存，保质期 12 个月。
▎使用方法：
蛋白标准品的准备
取适量 5mg/ml 蛋白标准品，稀释至终浓度为 0.5mg/ml。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用 0.9% NaCl 或 PBS 稀释标准品。稀释后的蛋白标准可以-20ºC 长期保存，也可 4ºC 短期保存，避免反复冻融。
BCA 工作液配制
根据样品数量，按 50 体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B(50:1)配制适量 BCA 工作液，充分混匀。例如 5ml BCA 试剂 A 加 100µl BCA 试剂 B，混匀，配制成 5.1ml BCA 工作液。BCA 工作液室温 24 小时内稳定。
蛋白浓度测定
1. 将稀释好的标准品（0.5mg/mL）按 0、1、2、4、8、12、16、20µl 加到 96 孔板的标准品孔中，用相应标准品稀释液补足到 20µl，相当于标准品浓度分别为 0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、 0.4、0.5mg/mL。
2. 加适当体积样品到 96 孔板的样品孔中。如果样品不足 20µl，用相应标准品稀释液补足到 20µl。 请注意记录样品体积。
3. 各孔加入 200µl BCA 工作液，37ºC 放置 20-30 分钟。
注: 也可以室温放置 2 小时，或 60ºC 放置 30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的 延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。
4. 用酶标仪测定 A562，或 540-595nm 之间的其他波长的吸光度。
5. 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品的蛋白浓度。
▎注意事项 ：
1. 需 96 孔酶标板，酶标仪一台，测定波长为 A562 nm 最佳。也可以使用分光光度计测定，但测 定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大 BCA 工作液的使用量使不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
2. 如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请使用本公司生产的 Bradford 蛋白浓度测定试 剂盒。
3. BCA 工作液配制过程中吸取 Reagent A 液和 Reagent B 液务必更换吸头，工作液新鲜配制后应立即使用，长时间放置会影响检测灵敏度。
4. 绘制标准曲线时，使用样品蛋白的溶解液稀释的蛋白标准品绘制的标准曲线最优。
5. 长期不用时，Cu 试剂与 PBS 稀释液可置于 2 ~ 8°C 保存，如发现细菌污染则应丢弃。BCA 试剂在低温条件下出现结晶沉淀时，可 37°C 孵育使其完全溶解，不影响使用。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
7. 本产品仅限科研使用。
Q1：标曲R2不符合要求是什么原因？
A1：主要是加样量不准确导致的误差，建议校正排枪，注意加样准确度。另外在进行分析时，可以去掉1-2个偏差较大的点，重新计算标曲。
Q2：样本浓度不在标曲范围内，该怎么操作？
A2：如果样本浓度太高，需要预先做稀释，最好是通过预实验确定样本稀释范围。
Q3：BCA使用注意事项。
A3：（1）需96孔酶标板，酶标仪一台，测定波长为A562 nm最佳。也可以使用分光光度计测定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液的使用量使不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时， 每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少；
（2）长期不用时，Reagent A/B可置于2-8℃保存，如发现细菌污染则应丢弃。Reagent A试剂在低温条件下出现结晶沉淀时，可37℃孵育使 其完全溶解, 不影响使用；
（3）如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请使用诺唯赞生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒；
（4）进行BSA标准蛋白标准曲线绘制时，使用样品蛋白的溶解液溶解BSA最优；
（5）BCA试剂对去污剂不敏感，可兼容SDS 3%、Tween-20 5%、EDTA 15 mM、无EGTA、Triton X-100 5%；对还原剂比较敏感，可兼容 DTT 0.5 mM、β-巯基乙醇 0.07%；
（6）BCA工作液配制过程中吸取Reagent A液和Reagent B液务必更换吸头，工作液新鲜配制后应立即使用，长时间放置会影响检测灵敏度；
（7）最好使用塑料比色皿，如使用玻璃比色皿或石英比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇清洗。
（8）为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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