PartI 产品知识
Q: 超滤离心管都有哪些用途？
A: 超滤离心管可以用于生物样品（蛋白，核酸，病毒等）的浓缩，脱盐，或者更换缓冲液。
Q: 超滤离心管有哪些规格？
A: 超滤离心管提供三种样本体积的规格：0.5 mL, 4 mL & 15 mL，每种 规格都含有5种标称截留分子量：5kDa，10kDa， 30kDa，50kDa，100kDa。如果处理更大体积的样本， 欢迎咨询技术支持。
Q: 超滤离心管的膜材质是什么？
A: 超滤离心管的膜材质为PES膜。
Q: 超滤离心管的化学相容性如何？
A: 超滤离心管适用于一般的水溶液或生物学样品，管殊样本的化学相容性请参考本文件中化学兼容性表格。
Q: 我可以重复使用超滤离心管么？
A: 所有的超滤离心管都是一次性的，不推荐重复使用。
Q: 超滤离心管可耐受的pH值范围是多少？
A: 对于PES超滤膜，说明书中所推荐的pH范围为1-14。具体酸碱类型及浓度请参考说明书中的化学兼容性表。
PartⅡ: 产品选择
Q: 我该如何选择合适的装置用于蛋白的浓缩？
A: 一般我们推荐选择的超滤离心管的标称分子量为目标蛋白的1/3以内。
Q: 如果要用超滤的方法分离两种蛋白，那么这两个蛋白的大小需要相差多少？
A: 按照经验，我们推荐两个蛋白的分子量要相差一个数量级（10倍）。
Q: 超滤离心管可以用于病毒浓缩么？
A: 可以。对于慢病毒，我们推荐100kDa MWCO；对于腺病毒，推荐 50kDa MWCO。
Q: 超滤离心管可以用于纳米颗粒纯化与浓缩么？
A: 可以。虽然我们没有内部数据支持这一应用，但是有很多客户超滤离心管用于纳米颗粒的浓缩及纯化，并获得很好的结果。超滤离心管的标称分子量对应的膜孔径范围请参考右图：
Q: 超滤离心管可以用于外泌小体的纯化与浓缩吗？
A: 可以。外泌小体的直径在30-100nm左右，推荐50-100kDa进行浓缩
Part Ⅲ:实验操作
Q: 如果使用超滤离心管，要配什么样的离心转子，最大离心力是多少？
A: 具体参数请参考下表：
Q: 处理后样品怎样收集？
A: 两种方式：移液枪转移和反转离心
1. 对于15 mL和4 mL的超滤离心管，可以直接通过移液枪收集处理后样品
2. 对于0.5 mL的超滤离心管，可以通过反转离心的方式收集处理后样品：将有浓缩样品的超滤离心管（内管）倒置于新的离心管中后，低速离心（1,000 g）后将样品重新离心到新离心管中（如下图步骤所示）
Q: 超滤离心管的样品会因为离心时间过长而变干么？
A: 不会，因为有死体积设计，总会有溶液残留在滤管中。
Q: 超滤离心管可以用酒精消毒灭菌么？
A: 装置与70%乙醇是兼容的，但是我们对灭菌处理的具体方法没有做相关的测试，所以无法提供更进一步的参考信息。
Q: 超滤装置是否可以用于高压灭菌？
A: 不可以。
Q: 是否提供无热源的超滤装置？
A: 我们提供的超滤装置均非无热源的，即使是无菌装置也可能包含热源。
Q: 超滤离心管是否不含RNA酶？
A: 我们不保证超滤离心管不包含RNA酶，建议您可以用0.1% DEPC在37度浸泡2小时，以完全灭活RNA酶。残留的DEPC可以用超纯水洗涤除去。
Q: 说明书中推荐在室温下进行离心，考虑到蛋白的稳定性，我是否可以在4℃进行离心？
A: 可以，但是低温会增加蛋白样品的粘性，导致流速减慢，建议可将离心时间延长到原来的 1.5倍。
Q: 如何对超滤离心管进行去除内毒素的处理？
A: 我们提供的超滤离心管是没有经过去内毒素处理的，同时由于内毒素通常以多聚体的形式存在， 大小在10-1000kDa之间不等，在超滤的过程中是无法去除的。
Part Ⅳ:结果分析
Q: 用超滤离心管去除去污剂是有什么需要注意的吗？
A: 去污剂因其独特的性质，当浓度大于临界微团浓度（Critical Micelle Concentration, CMC）时，去污剂分子会聚集形成微团分子而改变分子构象，这有可能会影响去污剂的去除效果
Q: 我的蛋白在浓缩时出现了沉淀为什么？
A: 蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。我们建议蛋白浓缩后的最终浓度不超过20mg/ml. 对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白，我们建议的改进方法是：
1离心力降为推荐离心力的30%-50%。
2改选择下一级过滤装置（如原本选用10kDa，此时可以选择30kDa） 3在浓缩过程中，取出超滤离心管，用枪头反复吹吸几次。
Q: 浓缩后我发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因是？
A: 首先，超滤离心管的最低起始蛋白浓度为25ug/ml. 请确保您的样本的起始浓度大于这个浓度。 其次，如果问题仍然出现。请不要丢弃您的样本滤过液，以做下一步分析：
1如果您的样本在滤过液中，那么请排查：
- 您是否选择了合适截留分子量的超滤离心管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？
- 使用的离心力是否是在最高范围内？如果您使用的是rpm，需根据离心半径，换算成相应离心力离心机最近是否有校准过？
- 您是否首次尝试这个蛋白？如果能确保你用同样的超滤离心管对其他蛋白成功操作的话， 那么有可能是您的目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用上一分子量级别的超滤离心管（如原本选用30kDa，此时可以选择 10kDa）。
2如果您的样本也不在滤过液中：
- 您的样本起始蛋白浓度是否大于25ug/mL？
- 您用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
- 您的目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀的 FAQ
Q: 我用浓缩后的蛋白做下游分析时发现有干扰，可能原因？
A: 超滤离心管中的超滤膜含有微量甘油。如果此材料干扰分析，可用缓冲液或超纯水预清洗。如果干扰仍然存在，用0.1 mol/L NaOH清洗，然后用缓冲液或超纯水再次清洗后甩干
Q: 有时候我用超滤离心管连水都离不下来，可能原因？
A: 超滤离心管中的超滤膜含有微量甘油。如果出现这种情况，先用0.1 mol/L NaOH清洗再离心。最后用缓冲液或超纯水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用， 如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。
Q: 使用超滤离心管对蛋白进行浓缩的过程中怀疑目的蛋白和膜之间可能存在非特异性吸附，如何 改善这一现象？
A: 超滤离心管使用的是PES膜材质，拥有低蛋白吸附能力。但是对于一些疏水性蛋 白或非极性蛋白，它们和膜的非特异吸附可能会增强，对于这种情况，客户可以尝试在实验 前对超滤离心管进行封闭处理，详细步骤可联系技术支持。
同时也可建议客户通过减小膜面积来降低非特异性吸附。
电话：400-037-9698 
邮件：support@lianweibio.com
地址：北京市北京经济技术开发区文化园西路8号院36号楼1120
