▎实验流程 ：
快速操作流程
1. 准备工作
检查 Wash Solution 中是否已经加入无水乙醇。
检查 Buffer D 是否出现沉淀。
将水浴锅或金属浴调至 50 ~ 55 °C。
2. 从琼脂糖凝胶中割下含目标片段的胶块，称重。
3. 加入胶块重量3~6 倍的 Buffer D，50 ~ 55 °C水浴 7~10 min溶胶。
注意：对于 < 500 bp 的片段，胶块完全融化后，再加入1 / 3 Buffer D体积的异丙醇。
4. 将溶胶液移入吸附柱中，12,000 rpm 离心 30 ~60 sec，倒掉收集管中液体。
5. 加入500 μL Wash Solution，12,000 rpm 离心 30 sec，倒掉收集管中液体。
6. 重复步骤5一次。
7. 空吸附柱12,000 rpm离心 1 min。
8. 将吸附柱置于1.5 mL 灭菌的离心管中，室温晾干2min，加入30~50 µL Elution Buffer至吸附柱中央，静置
1 min； 12,000 rpm 离心 1 min，弃去吸附柱， DNA溶液保存于-20℃。
标准操作流程
1. 准备工作
检查 Wash Solution 中是否已经加入无水乙醇（乙醇终浓度为80%），混匀后在瓶身做标记。
检查 Buffer D 是否出现沉淀。如有沉淀，请于 37 °C 溶解沉淀，待冷却至室温后使用。
提前将水浴锅调至 50 ~ 55 °C。
2. 通过琼脂糖凝胶电泳将目的DNA片段与其它片段分开，在紫外灯下快速切下含目的DNA片段的琼脂糖凝胶块*，并尽量去除多余的凝胶，放入 1.5 mL 离心管中，称重*。
*切胶过程尽可能快，减少DNA在紫外线中的暴露时间以降低对DNA的损伤。
*每管琼脂糖凝胶块不要超过 400 mg，否则导致溶胶不完全。
3. 根据胶块的重量和浓度*，按100 mg 琼脂糖加300 ~ 600 µL 的比例加入Buffer D。将离心
管置于50 ~ 55 °C水浴 7~10 min。水浴期间颠倒混匀2次加速溶胶。
*凝胶浓度 ≤ 1%，每100 mg 凝胶加入 300 µL Buffer D；
凝胶浓度 > 1%，≤ 1.5%，每100 mg 凝胶加入 400 µL Buffer D；
凝胶浓度 > 1.5%，≤ 2%，每100 mg 凝胶加入 500 µL Buffer D；
凝胶浓度> 2%，每100 mg 凝胶加入 600 µL Buffer D。
4. (选做) 当目的片段 < 500 bp时，加入1 / 3 Buffer D体积的异丙醇，混匀。当目的片段≥ 500 bp 时，此步
骤可以省略，直接进行步骤 5。
5. 将溶化好的溶液移入吸附柱*，静置1 min，12,000 rpm 离心 30~60 sec。倒掉收集管中液体，将吸附柱放
入同一个收集管中。
*如果溶胶液总体积大于750 µl，则分批加入。
6. 向吸附柱中加入500 μL Wash Solution*，12,000 rpm 离心 30 ~ 60 sec。倒掉收集管中液体，将吸附柱放入
同一个收集管中。
*Wash Solution 首次使用前请检查是否已加入正确量的无水乙醇。
7. 重复步骤6一次。
8. 将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm离心 2 min，尽量去除Wash Solution。
9. 将吸附柱置于1.5 mL 灭菌的离心管中，开盖静置2 min，彻底晾干。加入 30 ~ 50 µL Elution Buffer至吸附
柱中央*，静置1 min。 12,000 rpm 离心2 min。弃去吸附柱，DNA溶液保存于-20℃。
*Elution Buffer 为 1 mM Tris-HCl，0.1mM EDTA，pH 8.0，可以用 TE或超纯水（ pH > 7.0 ）代替。
将Elution Buffer 预热至 55 °C 可以进一步提高得率。
请勿使用小于15 μL的洗脱液进行洗脱。
▎注意事项 ：
1. 首次使用前按 Wash Solution 试剂瓶标签所示，加入无水乙醇稀释 Wash Solution （乙醇终浓度为80%），
混匀后在瓶身做好标记，于室温密封保存。
2. 提前将水浴锅调至 50 ~ 55 ℃。
3. 凝胶必须完全溶化，否则将严重影响DNA回收率。
4. 所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
5. 对于 < 100 bp 和 > 10 kb的DNA片段，可适当增加吸附和洗脱的时间。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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